ABCC11基因SNP在腋臭发病中作用机制的研究及临床应用的探索

发布时间：2017-12-02 14:25

本文关键词：ABCC11基因SNP在腋臭发病中作用机制的研究及临床应用的探索

【摘要】：腋臭,俗称狐臭,是一种常见疾病,临床表现为双侧腋部难闻的气味,患者多有家族史。虽其本身不对机体健康造成直接损害,但其散发出的难闻气味,给患者带来很大自卑感及心理负担,影响人际交往及日常生活。因此,患者往往不断寻求诊治,且多要求彻底祛除。目前腋臭的治疗方法种类繁多,可分为保守治疗和手术治疗。保守治疗有效时间相对较短,一般难以达到彻底根治。手术治疗仍是目前祛除腋臭最为彻底的方法。但是手术治疗痛苦相对较大,还可能出现难以接受的并发症。因此,寻求一种疗效持久,痛苦少,并发症少,为大家公认的方法仍需要不断的研究和尝试。但是,临床上对腋臭的诊断和治疗存在着以下瓶颈：首先,腋臭症的确切发病机制尚不明确。一般认为特殊异味的产生来自于腋窝部的顶泌汗腺。其分泌物质经皮肤表面的细菌作用,分解为多种不饱和脂肪酸,从而产生特殊的气味。但是其具体分子机制及典型的常染色体显性遗传性未得到良好的解释。因此,对腋臭遗传基础的进一步研究有助于揭示其发病机制并为腋臭的治疗提供新方向。其次,目前在临床上,腋臭的诊断仍主要根据患者腋部特殊异味的主观感觉判断,仍缺乏客观可靠的指标。特别是对腋臭较轻以及术后异味残留的患者,仅凭气味判断严重程度有时存在一定的争议。再次,腋臭的严重程度及疗效评价标准尚不统一,以至于各种治疗方法难以进行科学有效的比较研究。因此,腋臭发病机制的进一步研究对寻找腋臭客观的诊断及评价指标、指导腋臭的治疗及相关治疗药物的研发均具有重要的临床意义和价值。目的： 1.分析ABCC11基因单核苷酸多态性与腋臭发病的相关性,分析不同基因型与腋臭的严重程度的关系； 2.研究腋窝顶泌汗腺中ABCC11基因编码蛋白在腋臭患者与正常人的表达差异,进一步探讨ABCC11单核苷酸多态性在腋臭发病中的作用机制。 3.人顶泌汗腺细胞体外模型的建立,培养并观察腺细胞的生长特性,分析ABCC11基因不同基因型顶泌汗腺细胞的生长及增殖差异,为进一步的研究打下基础。 4.检测不同基因型人顶泌汗腺中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表达及转录水平,分析二种蛋白的相关性,进一步揭示腋臭的发病机制,也为寻找腋臭的临床诊断及疗效评价的客观指标提供新方向。 5.采用负压剥离结合消痔灵灌注的新方法治疗腋臭,随访观察治疗效果及并发症,结合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表达水平的检测评价手术效果,分析基因型、腋臭严重程度、疗效及预后的关系。为腋臭的诊断评价指标及腋臭的手术治疗方法的改进提供理论依据。方法： 1.取正常成人及腋臭患者外周血液以提取DNA,应用聚合酶链式反应-高分辨率溶解曲线(PCR-HRM)技术,结合测序验证检测ABCC11基因多态性位点rs17822931的基因型,分析不同等位基因在腋臭患者及正常人群中的分布情况,探讨其与中国汉族人群腋臭发病的相关性。 2.建立人顶泌汗腺细胞体外模型,观察不同基因型人顶泌汗腺细胞的生长特性并绘制生长曲线,分析不同基因型对人顶泌汗腺细胞增殖能力的影响。 3.随机收取不同基因型的受试者腋窝全层皮肤标本,采用组织切片观察顶泌汗腺的形态,采用免疫组织化学、realtime-PCR及western-blotting技术检测不同基因型腋窝顶泌汗腺组织中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白的表达和转录水平,采用SPSS13.00软件进行统计,分析两种蛋白水平之间的相关性及与腋臭程度的关系,分析二种蛋白表达水平在不同基因型组间是否存在差异,P0.05认为有统计学意义。 4.收集于湘雅医院整形美容外科门诊行负压剥离结合消痔灵灌注祛除腋臭患者的一般情况及相关临床资料,随访观察并记录治疗效果及并发症,与其他报道的方法进行对比分析,评价该治疗方法的效果,为手术方法的进一步改进提供理论基础；结合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表达水平的检测分析评价手术效果,为寻找手术后疗效评价的客观参考指标提供理论依据。结果： 1.ABCC11基因多态性位点rs17822931存在三种基因型：G/G、A/G、A/A,在52个病例组中频率分别为9.62%、88.46%、1.92%；在52例对照组均为AA型；98.08%的腋臭患者存在G型等位基因,说明该位点的G型等位基因是腋臭的发生的显性遗传因素。不同基因型之间腋臭的严重程度存在差异且有统计学意义(P=0.0350.05)； 2.收集腋窝全层皮肤标本58例,其中AA型的正常人8例,不同程度的腋臭患者50例(GG型5例,GA型45例)；免疫组织化学染色结果显示ABCC11及ApoD蛋白均特异性的在人腋窝顶泌汗腺细胞中表达。不同程度的腋臭患者腋窝皮肤中两种蛋白的表达水平存在差异；ABCC11/MRP8蛋白表达阳性率的秩和检验分析显示GG型及GA型的腋臭患者腋窝顶泌汗腺中的ABCC11/MRP8阳性率明显高于基因型为AA型的正常人；但GG型与GA型的ABCC11/MRP8阳性率差异无统计学意义。 3.光镜下观察腋窝皮肤组织切片样本显示：基因型为GG及GA型的腋臭患者的顶泌汗腺数量及处在分泌活跃期的顶泌汗腺比例均明显高于基因型为AA型的正常人。GG型及GA型之间无显著的统计学差异。 4.顶泌汗腺细胞培养观察表明不同基因型的细胞具有共同特征：培养潜伏期为1-2天；3天后细胞增殖活跃,进入对数增殖期,细胞呈‘鹅卵石’样,体积较大、透明度好；对数增殖期持续约10-12天,直至第7天达峰值,第12天各基因型的人顶泌汗腺细胞增殖受到不同程度的抑制。通过绘制生长曲线并分析比较,显示GG型及GA型人顶泌汗腺细胞在第6天、第9天,第12天的细胞数量明显多于AA型,差异具有统计学意义。 5.免疫组织化学、Western blotting及PCR检测结果显示腋臭患者腋窝顶泌汗腺中的ABCC11和ApoD表达及转录水平均明显高于正常人,ABCC11的基因型与其mRNA及蛋白水平存在相关性。ABCC11与ApoD蛋白的水平相关性分析显示二者呈正相关。 6.收集并随访从2009年3月至2013年3月于湘雅医院整形美容外科门诊行负压剥离结合消痔灵灌注祛除腋臭的患者171名,其中重度63例,中度81例,轻度27例,随访6个月至26个月。随访显示治愈316侧,占92.4%；有效26侧,约占7.6%,有效率100%；满意度调查显示,157例患者对手术效果表示非常满意(91.8%),13例患者表示基本满意(占7.6%),满意度达99.4%。与已有各种腋臭治疗手术方法比较,认为该手术方法满意度相对较高,并发症发生率相对较低。 7.手术前后腋窝皮肤Western blotting及PCR结果显示术后ABCC11/MRP8和ApoD表达明显减少或无表达。不同严重程度与治愈率检验分析显示：中度及轻度患者的治愈率相对重度较高,有统计学意义；结论： 1.ABCC11基因rs17822931位点单核苷酸多态性是腋臭形成的重要遗传因素,G型等位基因的存在是腋臭发生的遗传基础；该基因在腋窝大汗腺中特异性的表达,其表达水平在不同基因型存在差异,影响腋臭的严重程度。ABCC11基因rs17822931位点单核苷酸多态性基因型的检测可作为临床上客观诊断及评价腋臭的参考依据之一； 2.ABCC11不同基因型的顶泌汗腺内蛋白表达水平及mRNA水平存在差异,该基因可能是通过调控转运多种脂类腋臭前体物质的蛋白量,直接影响臭味物质的分泌,从而决定腋臭的发生。 3.不同腋臭严重程度顶泌汗腺ABCC11/MRP8及ApoD的表达水平不同,术后两种蛋白的水平明显减少,两种蛋白的表达水平呈正相关,但相关性较弱。ABCC11/MRP8及ApoD检测有助于腋臭的诊断及疗效评判。 4.ABCC11基因单核苷酸位点多态性的不同基因型对大汗腺的生长增值及新陈代谢存在一定的影响,但其具体机制有待进一步的研究。图25幅,表23个,参考文献65篇
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.741

【参考文献】

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