慢病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡

发布时间：2017-12-03 02:02

  本文关键词：慢病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡

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【摘要】：目的探讨慢病毒介导的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2-shRNA对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响。方法依据CDK2基因序列,设计3条靶向干扰CDK2的序列,构建CDK2-shRNA慢病毒载体,质粒转染人胚肾细胞株(HEK293)细胞进行慢病毒包装,滴度测定包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,免疫印迹检测对CDK2的干扰效率及对细胞周期蛋白(cyclin)E、E2F1、RB蛋白表达的影响,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测A375凋亡的发生。结果成功获得包装的重组p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒,病毒滴度为5×108TU/ml。重组的p GMLV-CDK2-shRNA慢病毒能有效下调CDK2、cyclin E、E2F1蛋白表达,抑制A375细胞增殖和触发凋亡。结论基于慢病毒介导的CDK2-shRNA能够促进黑色素瘤细胞A375凋亡发生,为黑色素瘤的基因治疗提供理论支撑。
【作者单位】： 福建中医药大学附属厦门市第三医院皮肤科;吉林大学中日联谊医院普通外科;黑龙江中医药大学生化教研室;
【基金】：厦门市卫生局资助项目(No.3502Z20130190) 厦门市同安区科技局资助项目(No.20120081)
【分类号】：R739.5
【正文快照】： 黑色素瘤的发病率在全球范围内呈现递增趋势〔1〕。浅表扩散性黑色素瘤(SSM)、恶性雀斑样痣黑色素瘤(LMM)、结节性黑色素瘤(NM)和肢端雀斑样痣型黑色素瘤(ALM)为目前严重威胁人类生命健康的黑色素瘤〔2〕。细胞周期蛋白(cyc-lins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋

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