人表皮细胞对胰酶耐受及黑素小体转运的相关研究

发布时间：2017-12-04 23:10

  本文关键词：人表皮细胞对胰酶耐受及黑素小体转运的相关研究

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【摘要】：目的:观察人表皮细胞对胰酶消化的耐受能力,探索分离和纯化表皮细胞的新方法,探讨胰酶耐受细胞的干性表达。并在原代细胞培养的基础上,探索角质形成细胞(Keratinocyte,KC)对黑素小体(Melanosome,MS)的吞噬,同时验证烟酰胺对吞噬的抑制作用。方法:(1)中性蛋白酶及胰酶消化获取表皮细胞,用0.25%的胰酶悬浮表皮细胞,以3.0×105/ml的细胞密度种植于12孔板,每间隔半小时或1小时终止胰酶1孔,其中胰酶作用时间最长达46小时,同样地胰酶处理培养过的表皮细胞,记录不同细胞贴壁时间、生长状态,并在接种后第7天,对贴壁细胞进行Nestin、Sox10抗体免疫细胞化学染色。(2)从人毛发中提取的黑素小体经透射电镜检测后,加到人原代角质形成细胞中,观察黑素小体是否被吞噬,用HMB-45抗体免疫细胞化学染色检测。同时利用Millicell建立了黑素细胞(Melanocyte,MC)和角质形成细胞共培养模型,用HMB-45荧光抗体标记角质形成细胞吞噬的黑素小体,并分别加烟酰胺进行干预。结果:(1)随着胰酶作用时间的延长,贴壁细胞数目递减,细胞贴壁所用时间也延长。所有孔中最早出现的贴壁细胞为树突状细胞,这些细胞开始生长缓慢,大约4天后生长迅速,10天后部分孔出现鱼群样细胞团。培养过的表皮细胞胰酶消化后结果和原代细胞类似,但不出现细胞团。部分孔经Nestin、SOX10抗体的免疫细胞化学染色结果均为阳性,其中以Nestin抗体较明显。(2)角质形成细胞能吞噬从人毛发中提取的黑素小体,在共培养模型中,黑素细胞产生的黑素小体可以通过孔径为8微米的孔膜,并被其下的角质形成细胞所吞噬,两者均验证了烟酰胺抑制吞噬作用。结论:(1)人表皮细胞对胰酶消化的耐受能达46小时,中和后,黑素细胞贴壁早于角质形成细胞,贴壁后大多数细胞增殖力强,干细胞表面标记显示阳性。(2)角质形成细胞可以吞噬从毛发中提取的黑素小体,Millicell共培养模型可以用于黑素小体转运的研究中,并为黑素小体转运的研究提供新方法,从而为美白制剂的筛选提供新思路。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R751

【参考文献】

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1 宋东颖;王毅;孙岚;张英鸽;;肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2012年05期

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本文编号：1252681