银屑病角质形成细胞中内质网应激状态的研究

发布时间：2017-12-06 18:30

  本文关键词：银屑病角质形成细胞中内质网应激状态的研究

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【摘要】：目的：银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,其病因及发病机制尚未明确。研究表明内质网应激(endoplasmic reticulum stress ERS)调节炎症介质产生,在慢性炎症中发挥重要作用。但就内质网应激在银屑病发病机制中的作用尚未受到重视。因此,本课题以银屑病角质形成细胞(keratinocytes, KCs)为研究对象,研究银屑病KCs中内质网结构、ERS标志蛋白及肿瘤坏死因子(TNF)-a的变化,初步明确银屑病角质形成细胞中内质网应激状态及其与炎症介质TNF-a之间的关系,为进一步阐明角质形成细胞中内质网应激在银屑病发病机制中的作用提供理论和实验基础。方法：征得本院伦理委员会同意。以进行期寻常型斑块状银屑病患者皮损部位角质形成细胞为研究对象；应用透射电子显微镜观察标本角质形成细胞中内质网微结构,分析生理病理状态下角质形成细胞中内质网形态及结构的的改变；采用免疫印迹(Western-blot)技术检测标本KCs中ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein78, GRP78)和炎症因子TNF-a,统计学分析GRP78与TNF-a表达变化,及其之间的相关性；用免疫组织化学法定位检测GRP78和TNF-a指标在标本表皮的分布。结果：(1)银屑病角质形成细胞中内质网数量增多,体积增大。透射电子显微镜观察的结果显示：对照组角质形成细胞排列整齐,内质网数量较少,主要集中于细胞核周围,结构正常；而银屑病皮损角质形成细胞排列紊乱,代谢活跃,内质网数量增多,结构膨胀、扩张,网状结构直径相对较粗。(2)银屑病角角质形成细胞中内质网应激标志Bip/GRP78表达增高；蛋白质免疫印迹(Western-blot)结果显示：与对照组相比,银屑病患者KCs中Bip/GRP78蛋白含量显著高增高,差异具有统计意义(0.79±0.31vs0.42±0.24, P＜0.001);免疫组化的结果显示对照组Bip/GRP78少量、散在分布于表皮,且主要局限于表皮基底细胞层；而在银屑病标本中,Bip/GRP78的表达显著增强,且弥漫分布于表皮全层,表达强度明显高于对照组,且在真皮上乳头的血管周围亦有表达。(3)银屑病角质形成细胞中TNF-a表达增高；蛋白质免疫印迹(Western-blot)结果显示：与对照组相比,银屑病患者表皮KCs中TNF-a表达水平显著增高,差异具有统计学意义(0.49±0.15vs0.17±0.10,P0.01)。免疫组化结果与Bip/GRP78分布类似,对照组TNF-α少量、散在分布于表皮,且主要分布于表皮基底细胞层；在银屑病皮损中,TNF-α的表达显著增强,且弥漫分布于表皮全层,表达强度明显高于对照组,且在真皮上乳头的血管周围亦有表达。(4)银屑病皮损部位内质网应激标志Bip/GRP78与TNF-α呈正相关：采用Pearson相关性分析银屑病皮损KCs中Bip/GRP78与TNF-α蛋白含量呈正相关(r=0.59,P0.01)。结论：银屑病角质形成细胞中内质网微结构发生改变,内质网应激标志蛋白Bip/GRP78在银屑病皮损高表达,提示内质网应激可能参与了银屑病的发病机制；Bip/GRP78与TNF-α呈正相关,大量数据显示内质网应激信号通路可诱导TNF-α分泌,因此我们推测,银屑病皮损表皮角质形成细胞中内质网应激可能调节TNF-α的生成。这是我们首次提出并证明内质网应激在银屑病发病机制中扮演重要角色,为揭示银屑病发病机制和合理治疗的机理提供理论基础和实验依据。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R758.63

【参考文献】

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1 林丽,唐朝枢,袁文俊;内质网应激[J];生理科学进展;2003年04期

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本文编号：1259573