马尔尼菲青霉酵母细胞黑素的分离纯化及理化性质的分析

发布时间：2017-12-08 08:26

  本文关键词：马尔尼菲青霉酵母细胞黑素的分离纯化及理化性质的分析

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【摘要】：目的提取、纯化马尔尼菲青霉(PM)酵母细胞的黑素并研究其理化性质,为PM的发病机制及其毒力作用的研究提供理论依据。 方法在基础液体培养基中加入2.0mM左旋多巴(L-DOPA)37℃振荡培养PM酵母细胞10-14天,通过溶壁酶、变性剂和浓盐酸等处理PM酵母细胞以分离提取黑素粗品,再用黑素“碱溶酸沉”的原理多次纯化得到黑素的纯品,然后采用化学分析、紫外光谱、红外光谱以及电子顺磁共振(EPR)波普研究了PM黑素的理化性质。同时使用黑素的特异性抑制剂(曲酸：特异性地抑制多巴黑素的合成；三环唑：特异性地抑制DHN黑素的合成)观察在BHI中培养的PM酵母细胞的黑素抑制情况,包括观察其菌落的颜色及培养基的颜色变化。 结果PM黑素与合成多巴黑素的理化性质很相似,均为黑色颗粒,均溶解于碱,耐酸,不溶于水和大多数有机溶剂,在PH≤3时出现沉淀,能被氧化剂H2O2漂白；紫外-可见光谱分析显示其在205nm处有最大吸收峰,其吸收值随着波长的增加而逐渐减小；红外光谱分析表明PM黑素具有经典的黑素红外吸收特征,即在3μm附近和6μm附近各有一个吸收峰；EPR提示PM黑素含有稳定的自由基。100μg/mL的曲酸和三环唑均能使在BHI中生长的PM菌落表面变淡,分泌到培养基中的黑素减少。 结论PM酵母细胞能利用外源性左旋多巴合成多巴黑素。曲酸和三环唑都能抑制BHI中PM酵母细胞黑素的合成,说明PM在BHI中既能合成多巴黑素,又能合成DHN黑素。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R756

【参考文献】

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本文编号：1265725