论文一:白癜风患者血清氨基酸水平分析 论文二:肌球蛋白Ⅹ对人HaCaT细胞伪足

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《大连医科大学》 2015年

论文一:白癜风患者血清氨基酸水平分析 论文二:肌球蛋白Ⅹ对人HaCaT细胞伪足的影响

沙扬  

【摘要】：目的:1.比较白癜风患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量与健康人的差异,为深入探讨其与该病的关系提供依据。2.探讨肌球蛋白Ⅹ对人角质形成细胞伪足的影响。方法:1.选取34例白癜风患者为病例组及31例健康人做对照,应用高效液相色谱法测定血清中谷氨酸及胱氨酸含量并进行比较。2.借助小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,采用MyoⅩ基因siRNA转染处理HaCaT细胞,以RT-PCR的方法在mRNA水平上筛选有效下调MyoⅩ的siRNA序列。3.根据所筛选出的RNA序列,构建重组慢病毒shRNA载体,即MyoⅩ-GFP-shRNA,同时构建不针对该细胞任何基因的阴性对照序列,即NCGFP-shRNA。将构建的重组慢病毒转染处理HaCaT细胞,建立稳定的细胞系,采用RT-PCR及Western Blot方法检测转染处理前后HaCaT细胞中MyoⅩ基因的mRNA及蛋白水平的变化。4.扫描电镜观察MyoⅩ-shRNA转染处理前后HaCaT细胞伪足的形态变化。5.流式细胞术检测慢病毒转染处理前后HaCaT细胞吞噬微球能力的变化。6.激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染处理前后HaCaT细胞吞噬微球的数量变化。结果：1.白癜风患者血清中谷氨酸和胱氨酸水平均有明显的变化,其中谷氨酸水平与对照组相比明显降低,而胱氨酸水平却明显升高,两组差异经统计学检验均有显著性意义(P0.05)。2.在不同性别、年龄、期别的白癜风患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量均无明显差异(P0.05)。3.所设计的MyoⅩ基因重组慢病毒能有效下调MyoⅩ基因mRNA及蛋白表达水平。4.扫描电镜观察MyoⅩ基因重组慢病毒转染后HaCaT细胞伪足数量减少。5.流式细胞术检测MyoⅩ基因重组慢病毒转染处理后HaCaT细胞吞噬微球能力降低。6.共聚焦显微镜检测MyoⅩ基因重组慢病毒转染处理后HaCaT细胞吞噬微球的数量的减少。结论:1.白癜风患者谷氨酸及胱氨酸代谢异常,提示应关注其对患者疗效的影响。2.MyoⅩ影响HaCaT细胞伪足的形成,下调MyoⅩ在HaCaT细胞中的表达,可以减少HaCaT伪足的形成,并能够降低其吞噬功能。

【关键词】：
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R758.41
【目录】：

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