10及纳米脂质体槲皮素对人角质形成细胞的效应

发布时间：2016-10-28 15:58

  本文关键词：IP-10及纳米脂质体槲皮素对人角质形成细胞的效应，，由笔耕文化传播整理发布。

《郑州大学》 2013年

IP-10及纳米脂质体槲皮素对人角质形成细胞的效应

余斌  

【摘要】：银屑病是一种病因复杂的慢性炎症性、自身免疫性疾病。人群患病率约为2-3%。银屑病的组织病理结果显示为角质形成细胞的过度增殖,淋巴细胞、中性粒细胞等炎症细胞以及大量炎症因子、趋化因子如IFN-γ、IL-1、CXCL12、CCL19等的浸润。这些细胞和相关细胞因子及趋化因子共同参与银屑病的发病,对银屑病局部皮损的形成,以及全身症状的产生都发挥了重要的作用。IFN-γ是关键的细胞因子之一。T细胞产生IFN-γ,刺激角质形成细胞产生IL-8、CCL20、CXCL9,尤其是CXCL10,这些细胞因子可以活化更多T细胞,引起炎症反应的放大。同时,IFN-γ还可诱导THO向TH1转化。IP-10是由IFN-γ诱导产生的分子量约为10kDa的蛋白质。IP-10也参与了银屑病的病理生理过程,其可以趋化多种炎症细胞,如T淋巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等,促进细胞因子释放；同时还可促进角质形成细胞的增殖。本研究通过对比IFN-γ和1P-10对人角质形成细胞的效应,进一步探讨其在银屑病发病中的作用,为银屑病的病因研究提供实验依据。 银屑病病程较长,是一种反复发作的疾病。患者用药时间长,且随着发病次数的不断增加,对药物的反应也会随之降低。目前糖皮质激素在银屑病的治疗中应用较为广泛,虽然疗效尚可,但长期应用,副作用明显。可引起皮肤萎缩、毛细血管扩张、毛囊炎、色素沉着或减退等。大面积长期应用强效糖皮质激素制剂可引起全身反应,停药后甚至诱发脓疱型或红皮病型银屑病。随着人们生活水平的提高,对生活质量的要求增高,安全性更高、疗效性更好的药物有待研发。槲皮素及其衍生物是一种黄酮类化合物,广泛存在于植物界,如山楂、茄子、洋葱等。其生物活性多样,包括抗炎、抗肿瘤、抗氧化等,目前抗肿瘤是研究的热点,而其对银屑病增殖的角质形成细胞效应的研究较少。本研究通过对比纳米脂质体槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)对增生的角质形成细胞的效应,为银屑病的治疗的研究提供一个新的依据。 目的： 探讨IP-10及干扰素-γ(IFN-γ)对人角质形成细胞的作用及其在银屑病发病中的机制；并对比纳米脂质体槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)对增生的人角质形成细胞的效应。 方法 1.MTT方法检测细胞生长率及生长抑制率 根据加入的药物,将培养的正常HaCaT细胞分为nQ组(40μmol/L50/μmol/L、60μmol/L)、Dex组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)、IFN-γ组(50u/mL、100u/mL、150u/mL)、IP-10组(20ng/μl、30ng/μl、40ng/μl)以及不加药的对照组(C)。培养48h后,MTT实验方法检测细胞生长率及生长抑制率。 2.斑点原位杂交 2.1IP-10及c-myc探针的制备 应用随机引物法,制备生物素标记IP-10和c-myc探针,应用mRNA斑点原位杂交检测探针灵敏度。2.2mRNA斑点原位杂交 根据加入的药物,将培养的正常HaCaT细胞分为nQ组(50μmol/L)、Dex组(10-6mol/L)、IFN-γ组(100u/mL)、IP-10组(30ng/μl)以及不加药的对照组(C)。48h后,提取各组细胞的总RNA。应用IP-10和c-myc探针的mRNA斑点原位杂交技术对比检测各组]mRNA的杂交信号。 2.3cDNA斑点原位杂交 (1)根据加入的药物,将培养的正常HaCaT细胞分为nQ组(50μmol/L)、Dex组(10-6mol/L)、IFN-γ组(100u/mL)、IP-10组(30ng/μl)以及不加药的对照组(C)。48h后,提取各组细胞的总DNA。 (2)提取正常男性包皮组织及寻常型银屑病患者病变组织的总DNA。 (3)应用IP-10和c-myc探针的DNA斑点原位杂交技术对比检测各组细胞及组织的cDNA的杂交信号。 3.统计学分析 应用SPSS16.0软件进行分析,实验数据用平均数±标准差(x±s)表示。采用t检验比较两组间总体均值,用LSD-t检验进行多个样本的两两比较,检验标准为α=0.05,当p0.05时差异有统计学意义。 结果 1.MTT结果显示：IFN-γ及IP-10的GR和nQ及Dex的GSR均呈剂量依赖性,P0.05。 2.斑点原位杂交 2.1IP-10和c-myc探针结果显示：两组探针灵敏度均达0.1pg/μl。 2.2mRNA原位杂交结果显示：IFN-γ及IP-10的信号高于C组,P0.05； 2.3nQ及Dex的信号低于C组,P0.05。cDNA原位杂交结果显示：IFN-γ及IP-10的信号高于C组及正常组织,P0.05,IFN-γ及IP-10的信号与病变组织差异无统计学意义,P0.05；联合用药组的信号与正常对照组及正常组织的差异无统计学意义,P0.05。 结论 1.干扰素-γ及IP-10促进人角质形成细胞的生长,其作用为剂量依赖性。 2.槲皮素及地塞米松抑制增殖状态的人角质形成细胞的生长,其作用为剂量依赖性。

【关键词】：
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

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