强脉冲光对TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的影响及ERK抑制剂的作用

发布时间：2018-03-30 08:56

  本文选题：强脉冲光　切入点：转化生长因子β1　出处：《中南大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的 1.观察转化生长因子-p1对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。 2.探讨强脉冲光在转化生长因子-p1介导的成纤维细胞增殖中的作用及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的研究。 方法 1.利用包皮环切术切除的正常青少年包皮组织,体外分离培养人正常皮肤原代成纤维细胞,采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型胶原染色进行成纤维细胞的鉴定。 2.实验分为3部分： (1)实验一：TGF-β1浓度处理组,采用不同浓度的TGF-β1分别处理各组成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况； (2)实验二：分为①TGF-β1浓度组：10.0ng/ml、5.0ng/ml、1.0ng/ml及0ng/ml.②时间组：给予10.0ng/ml的TGF-β1刺激细胞,分别在不同时间Omin、15min、30min、60min及120min的时间点提取蛋白。应用蛋白质免疫印迹(western blot)法测定各组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的变化。 (3)实验三：对照组、TGF-β11.0ng/ml、10.0ng/ml、IPL照射剂量72J/cm2组、72J/cm2+TGF-β110.Ong/ml、PD98059+72J/cm2组、PD98059+TGF-β110.Ong/ml组及PD98059+72J/cm2+TGF-β110.0ng /ml组分别处理成纤维细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况；应用蛋白质免疫印迹(western blot)法测定各组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的变化。 结果 1.体外培养成纤维细胞经Ⅰ、Ⅲ型胶原染色阳性,角蛋白染色阴性,细胞具有成纤维细胞形态。 2.1成纤维细胞经不同浓度转化生长因子-β1作用后,与对照组比较,各组浓度的TGF-β1分别处理24及48小时后,0.01ng/ml、0.1 ng/ml、1.0ng/ml、50.0ng/ml的TGF-β1对成纤维细胞增殖活性均无显著增加(P0.05),在TGF-β1浓度为10.0ng/ml时,细胞增殖活性较对照组显著增高(P0.05)。 2.2与对照组相比：TGF-β1各浓度组及时间组p-ERK蛋白表达均有差异,随着TGF-β1剂量的增加和作用时间的延长,其磷酸化ERK蛋白表达水平逐渐增强,在TGF-β1 10.0ng/ml时p-ERK表达达高峰,在15分钟时,磷酸化ERK蛋白表达水平开始增加,在60分钟时p-ERK表达水平达高峰。120分钟时p-ERK表达有所衰减。 2.3在抑制剂干预组中,与对照组相比：在IPL照射及TGF-β1作用24及48小时后,TGF-β110.0ng/ml、IPL照射剂量72J/cm2组和72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml组成纤维细胞增殖活性明显增加(P0.01),其磷酸化ERK表达水平亦增加。而PD98059+TGF-β110.0ng/ml、PD98059+72J/cm2较对照组细胞增殖活性降低(P0.05),但其磷酸化ERK表达水平稍有增加。余组未见明显变化。 结论 1.大剂量TGF-β1可促进体外培养的成纤维细胞增殖并且可上调细胞内的ERK信号蛋白活性。TGF-β1诱导的成纤维细胞的p-ERK水平增高可能是依赖ERK通路激活的。 2.强脉冲光可促进体外培养的成纤维细胞增殖,其增殖机制之一可能是通过ERK信号通路实现的。 3. TGF-β1与IPL在成纤维细胞增殖作用中可能存在协同交互作用。
[Abstract]:Purpose. 1. To observe the effect of transforming growth factor-p 1 on the proliferation of human skin fibroblasts in vitro. 2. To investigate the role of intense pulsed light in the proliferation of transforming growth factor-p1-mediated fibroblasts and the study of extracellular signal-regulated kinase (ERK) signaling pathway. Method. 1. Primary human normal skin fibroblasts were isolated and cultured by circumcision of prepuce. The fibroblasts were identified by keratin and collagen 鈪，

本文编号：1685214