IL-36α在咪喹莫特诱导小鼠银屑病皮损中的表达及IL-36抗体对CCL20的影响研究

发布时间：2018-04-02 10:35

本文选题：银屑病　切入点：白细胞介素-36α　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景银屑病(Psoriasis)是最常见的慢性炎症增生性皮肤病之一,病情复杂、易复发,给患者和家庭带来了巨大的精神和经济负担[1,2]。银屑病发病与链球菌感染、遗传易感性、环境因素、情绪、免疫紊乱等有关,其中持续的皮肤免疫系统应答失调在银屑病的发病及炎症过程中占有至关重要的地位[3,4,5],它可以导致各种慢性炎症性皮肤病的发生。由于免疫调节主要通过细胞因子间的相互作用来实现,因而细胞因子与银屑病的关系一直是国内外学者研究的热点。以往大量研究表明IL-23/IL-17轴在银屑病中起重要作用,然而近来研究发现IL-36炎症通路可能优于该轴在银屑病中的作用[6,7]。研究发现IL-36及其受体在银屑病患者皮损及血清中过度表达[8],敲除基因IL-36的咪喹莫特银屑病小鼠比敲除基因IL-17的小鼠表现出更大的治疗作用[9],腹腔注射IL-36抗体的小鼠可以使银屑病小鼠皮损减轻[10],这提示IL-36可能在银屑病发病机制中起重要作用。IL-36是一种新型促炎因子,属于IL-1家族,由3个生物学功能相似的分子:IL-36α,IL-36β及IL-36γ组成(既往命名为IL-1F6,IL-1F8及IL-1F9)[11]。目前有学者研究发现IL-36是角质形成细胞分泌CCL20的强烈诱导剂[12],皮下注射IL-36α可导致趋化因子、淋巴细胞等炎症细胞浸润[13],同时Yijun Carrier等也研究发现IL-36可以促进Th17细胞活化分泌更多IL-17,而CC趋化因子配体(CCL)20、CC趋化因子受体(CCR)6的表达与IL-17产生具有正相关性[14,15],这进一步提示了 IL-36与CCL20可能存在相互作用关系。综上所述,IL-36可以促进Th17细胞活化,并刺激角质形成细胞分泌CCL20,可能参与银屑病的发病机制,因而进一步探讨IL-36在银屑病的作用机理就显得极为重要。鉴于国外有研究报道IL-36家族中IL-36α在银屑病的作用可能优于IL-36β、IL-36γ[16],故本研究选择IL-36α作为研究对象,通过构建咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型,采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测IL-36α在小鼠银屑病皮损中的表达;另外,通过腹腔注射IL-36抗体,采用实时荧光定量PCR、免疫组化方法,研究IL-36抗体对银屑病样皮损及银屑病相关因子CCL20的影响,以进一步探讨IL-36家族在银屑病的作用机制,为银屑病的治疗及预后提供新的理论依据。研究目标1.构建咪喹莫特乳膏诱导的银屑病小鼠模型;2.初步探讨IL-36α在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损中的表达。3.研究IL-36抗体对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症是否具有缓解作用。4.研究IL-36抗体对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损中CCL20的影响,从而探讨IL-36参与银屑病的可能作用机理。研究方法1.建立咪喹莫特乳膏诱导的小鼠银屑病模型,对照组涂抹凡士林乳膏;2.通过实时荧光定量PCR、Western blot检测IL-36α在小鼠皮损中的表达。3.将BALB/c小鼠随机分为3组:空白对照组:凡士林乳膏+腹腔注射PBS缓冲液;模型组:咪喹莫特乳膏+腹腔注射PBS缓冲液;实验组:咪喹莫特乳膏+腹腔注射IL-36抗体。4.每天观察小鼠银屑病样炎症反应的变化,同时进行PASI评分;通过HE染色观察组织病理皮损改变,并测量表皮层的垂直厚度。5.通过免疫组织化学法、实时荧光定量PCR检测小鼠皮损中CCL20的表达。结果1.IL-36α在小鼠银屑病皮损及正常小鼠皮肤中的表达实时定量PCR结果显示,模型组IL-36α的mRNA的表达显著高于对照组(t=7.523,P0.05)。免疫印迹结果显示,模型组小鼠皮损中IL-36α的蛋白表达较对照组明显增加,差异有统计学意义(t=31.695,P0.05)。以上结果提示IL-36α可能参与了银屑病的发病机制。2.IL-36抗体对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的影响研究发现空白对照组小鼠背部皮肤未见明显异常;涂抹咪喹莫特第3天模型组部分出现淡红斑,随后皮肤渐渐出现增厚,到涂抹咪喹莫特乳膏第4-6天,模型组红斑颜色加深、鳞屑变厚密,第7-8天呈典型银屑病样改变,部分小鼠开始出现脱屑,可见点状出血、薄膜现象;相比模型组,IL-36抗体实验组在涂抹咪喹莫特第3天时小部分小鼠背部皮肤出现淡红斑伴少量鳞屑,至第5-8天鳞屑、红斑及皮肤厚度才慢慢加重,但各指标均不如模型组,且第8天实验组小鼠未出现典型的银屑病样炎症皮损,但鳞屑、红斑及增厚的指标仍比空白对照组明显升高。从临床表现来看,这表明IL-36抗体可以改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症反应。第8天取小鼠背部皮肤进行HE染色。结果发现对照组小鼠皮肤未见明显异常;模型组大部分小鼠皮损呈现典型的银屑病样改变,可见角质层增厚、表皮突延长增宽;而实验组小鼠表皮层较平整,角化不全的细胞数减少,且厚度较模型组低。从病理结果看,也表明IL-36抗体可以改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症反应。3.IL-36抗体对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损CCL20的影响免疫组化结果示空白对照组小鼠CCL20仅仅少量表达或无表达,颜色呈淡褐色;模型组小鼠CCL20表达主要定位于表皮层,颜色呈深褐色、棕褐色,着色细胞层数及数量较对照组显著增多;IL-36抗体实验组小鼠CCL20也主要定位于表皮层,着色细胞层数及数量明显比模型组低,CCL20染色呈浅褐色。免疫组化结果示,实验组与模型组相比,差异具有统计学意义(Z=3.25,P0.05),实验组与对照组相比,差异不具有统计学意义(Z =1.45,P0.5)。通过非参数检验分析,我们发现模型组和实验组小鼠CCL20主要表达于表皮层,且实验组、对照组与模型组在CCL20表达方面均具有显著性差异(P0.05)。实时荧光定量PCR也显示实验组(1.63±0.19)与模型组(2.65±0.47)皮损CCL20的差异有统计学意义(P0.05)。这提示IL-36抗体可以抑制CCL20在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病皮损中的表达。结论1.IL-36α在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损中表达升高,提示IL-36α可能参与银屑病的发病机制。2.IL-36抗体可以改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症反应,其作用可能与抑制CCL20的表达有关。
[Abstract]:IL - 36 and its receptors play an important role in the pathogenesis of psoriasis . The effects of IL - 36 on psoriasis - like skin lesions and psoriasis - like skin lesions were investigated by real - time fluorescence quantitative PCR and Western Blot . Western blot showed that the expression of IL - 3伪 in skin lesion of model group was significantly higher than that of control group ( t = 31.695 , P0.05 ) . The results showed that IL - 36 antibody could be involved in the pathogenesis of psoriasis . The results showed that IL - 36 antibody could improve imiquimod - induced psoriasis - like inflammatory reaction in mice . The results showed that IL - 36 antibody could improve imiquimod - induced psoriasis - like inflammatory reaction . The expression of IL - 36 伪 in the skin lesion of mice induced by imiquimod was significantly higher than that in the model group ( 2.65 卤 0.47 ) .

【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R758.63

【参考文献】