趋化素样因子1对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型调节作用的研究

发布时间：2018-04-16 11:20

本文选题：银屑病 + CKLF1　；参考：《首都医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：银屑病是一种以表皮增殖和炎症为主的自身免疫性皮肤病,其皮损特点是角质形成细胞增殖和分化加速,真皮内毛细血管增生及扩张,伴有大量T细胞持续性浸润。咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型是目前较成功且操作简便的模型,此模型产生的皮损形态、组织病理学特征及细胞因子改变均与银屑病病人类似。趋化素样因子1(Chemokine-Like Factor 1,CKLF1)是一种具有CC趋化因子结构特征和趋化功能的趋化因子,具有广谱趋化活性及促细胞增殖作用,参与了多种自身免疫性疾病和过敏性疾病病理过程,其重要的功能性受体为CCR4和CCR5。CCR4主要表达于树突状细胞、T淋巴细胞尤其为Th17细胞,Treg细胞等表面,在介导T细胞的归巢起重要作用。并有研究表明CKLF1的C端衍生肽C19、C27均可作用于CCR4受体,C19具有弱的趋化因子受体活化作用和较强的受体去敏感能力,表现为趋化因子受体拮抗剂。目的本实验研究CKLF1-C19及CKLF1-C27对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的影响和对皮损局部炎症细胞浸润及IL-23、IL-17A m RNA表达的调节作用,从而进一步揭示CKLF1在银屑病发病中的作用。方法1.选用7-8周龄的雄性Balb/c小鼠作为实验对象,随机分成空白对照组,模型组,C19组,每日分别给予凡士林乳膏,咪喹莫特乳膏,咪喹莫特乳膏及不同剂量C19处理一次,并对小鼠背部皮肤进行数码成像,记录PASI评分。第6日处死小鼠取背部皮损组织,一半4%多聚甲醛固定行石蜡切片,苏木精-伊红染色法染色,光镜下观察皮损病理变化;一半冻存于-80℃冰箱内,待做PCR检测。2.选用7-8周龄的雄性Balb/c小鼠作为实验对象,随机分成模型组,C27组,干预组,每日分别给予咪喹莫特乳膏;咪喹莫特乳膏及C27;咪喹莫特乳膏、C19及C27处理一次,并对小鼠背部皮肤进行数码成像,记录PASI评分。第6日处死小鼠取背部皮损组织,一半4%多聚甲醛固定行石蜡切片,一半冻存于-80℃冰箱内。3.石蜡切片行HE染色及免疫组化法检测小鼠皮损中CD3、CD31、Ki-67、MPO表达;冻存组织应用实时荧光定量PCR方法检测皮损中IL-23、IL-17A的m RNA表达。结果1.连续涂抹咪喹莫特于小鼠背部皮肤,可成功诱导小鼠银屑病样皮损。第2-3天时咪喹莫特组背部皮肤出现细小鳞屑,皮肤皱褶,第6天时皮肤为深红色,鳞屑呈层状,皮肤增厚明显。HE染色示咪喹莫特组表皮增生肥厚,伴有Munro微脓肿的出现,伴有角化不全,真皮浅层可见大量炎症细胞浸润及毛细血管增生扩张。2.C19组咪喹莫特诱导的银屑病样皮损减轻,表现为皮肤红斑颜色较咪喹莫特组浅,鳞屑减少,皮肤浸润程度减轻。抑制程度呈剂量依赖(10μg组=20μg组5μg组0.5μg组),PASI评分有差异性(P0.05)。其中C19 10μg组皮损中Ki-67、CD3、CD31、MPO表达较咪喹莫特组减少。皮损局部IL-23、IL-17A的m RNA表达量水平较咪喹莫特组降低,差异有统计学意义。3.局部皮内注射C27不影响小鼠模型大体表现及PASI评分。C27组皮损中Ki-67、CD3、CD31、MPO阳性细胞数较咪喹莫特组增多,皮损局部IL-23、IL-17A的m RNA表达量水平较咪喹莫特组升高,差异有统计学意义。4.C19可抑制C27在银屑病模型中的促进作用,表现为减少皮损中Ki-67、CD3、CD31、MPO阳性细胞数,降低皮损局部IL-23、IL-17A的m RNA表达量水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样模型建立成功。2.在银屑病小鼠模型中C27能促进皮损中T细胞、中性粒细胞浸润、促进血管内皮细胞增生及角质形成细胞增殖,增加局部IL-23、IL-17A m RNA的表达,起促进炎症作用。3.在银屑病小鼠模型中C19可减少皮损中T细胞、中性粒细胞浸润,抑制血管内皮细胞增生及角质形成细胞增殖,减少局部IL-23、IL-17A m RNA的表达,起抑制炎症作用。4.C19能抑制C27在银屑病小鼠模型中的促进炎症作用。
[Abstract]:Objective To study the effects of CKLF1 - C27 and CKLF1 - C27 on psoriasis - like lesions in mice and to investigate the role of CKLF1 in the pathogenesis of psoriasis . The expressions of CD3 , CD31 , Ki - 67 and MPO in skin lesions of mice were detected by HE staining and immunohistochemical staining . The expression of local IL - 23 and IL - 17A mRNA can be reduced and the inflammatory effect can be inhibited .

【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R758.63;R-332

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