microRNA-146a对IRAK1的表达调控在寻常型银屑病发病中的机制研究
发布时间:2018-05-12 03:22
本文选题:银屑病 + 微小RNA-146a ; 参考:《广州医科大学》2017年硕士论文
【摘要】:【背景】银屑病(psoriasis)是一种临床常见的慢性炎症性增生性皮肤病,其特征性皮损表现为境界清楚、厚层银白色鳞屑性斑块。银屑病发病机制不明确,是当前皮肤病领域内重点研究的疾病之一。基于家系及群体的流行病学研究均提示该病是具有遗传易感性的个体,在外界环境刺激下发生角质形成细胞和免疫细胞,包括T细胞、树突状细胞和中性粒细胞的表达失衡,导致角质形成细胞异常增殖,新生血管形成和炎性细胞浸润所致。目前普遍的观点认为,银屑病的发病是一种多基因遗传背景下多因素参与的T细胞免疫介导的皮肤病。银屑病具有很强的遗传易感性。目前全基因组关联研究发现越来越多的银屑病易感基因参与免疫细胞和角质形成细胞的功能,但其中的调控机制仍不清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类分布广泛调控基因表达的小的非编码RNA,长度约18-22个核苷酸。它们调节多种生物学信号通路,生物信息学数据显示,每个miRNA可以调节几十到数百个靶基因,这也表明miRNA可以影响所有的信号途径。mi RNA通过与靶基因mRNA的3'-非翻译区(3'-untranslated regions,3'-UTR)完全或部分互补结合,使mRNA发生降解或介导其翻译抑制,参与基因转录后水平的调控,在细胞发育、增殖、分化和肿瘤发生等生物学行为中发挥重要作用。近年来研究揭示了miRNA在免疫系统中同样发挥显著的调控作用,与自身免疫性疾病过程中的病理生理密切相关,参与调控机体免疫应答,但对其具体作用机制尚处于探索阶段。迄今为止,越来越多的研究发现miRNA参与到银屑病的发病过程中,且miRNA在银屑病患者皮损表达明显不同于未累及的皮肤和健康人皮肤。银屑病角质形成细胞的增生和分化异常通常伴随免疫细胞的浸润,大量细胞因子和趋化因子分泌及刺激。因此研究与银屑病发病免疫相关的miRNA显得尤为重要。人类微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)是miR-146家族中研究最多的一员,近年来研究发现,mi R-146a作为新型的免疫调节分子,在固有免疫调节、炎症反应以及抗病毒中发挥着重要作用。但对miR-146a与银屑病发病机制的关系研究,目前甚少报道。因此,明确miR-146a的靶基因及其对靶基因的作用机制有助于更加深入的了解其在银屑病的发病机理。通过靶基因预测软件及文献回顾分析发现miR-146a具有多个靶基因。其中,miR-146a对白介素1受体相关激酶1(Interleukin-1 receptor-associated Kinase 1,IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(receptor-associated factor 6,TRAF6)这两个免疫因子起抑制作用,防止炎症反应过激,从而对免疫细胞内信号转导起一种负反馈的调节作用。IRAK1是白介素1受体相关激酶(IRAKs)家族的一员,IRAKs是一类具有独特的死亡结构域蛋白激酶,在Toll样受体(TLRs)和白细胞介素-1受体(IL-1Rs)两个受体家族信号转导通路中发挥关键作用。此外,IRAK1作为关键环节调节TH17和Treg细胞分化之间的微妙平衡。本课题组成员在前期的研究发现miR-146a在寻常型银屑病患者外周血单个核细胞及皮损中异常高表达,并与寻常型银屑病的分期相关。IRAK1作为miR-146a的一个重要靶基因,在miR-146a相关的炎症反应中发挥重要作用。因此,我们推测miR-146a可能是一个与银屑病免疫状态密切相关的基因,与IRAK1共同作为银屑病免疫功能网络异常的一个环节,在疾病起始阶段调控整个免疫应答,或者调控下游细胞因子的分泌,促进银屑病的发生和发展。然而,对于异常表达增高的miR-146a促成银屑病发病过程的分子机制仍不是很清楚。【目的】研究寻常型银屑病患者皮损中miR-146a、IRAK1的表达,分析二者的相关性;通过体外实验探讨过表达或抑制miR-146a对人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的影响,鉴定mi R-146a调控的下游靶基因,系统揭示miR-146a在银屑病发生发展中的相关分子机制,并初步探讨mi R-146a对细胞因子分泌的影响。本研究可能为探索银屑病发病机制建立新的有效途径,为完善miR-146a参与银屑病的发病提供更多的理论支持,并为以miR-146a为靶点治疗及预后分析银屑病提供新的策略,从而加深对银屑病发病机制的认识,为研究银屑病提供新思路。【方法】1、筛选并收集各30例寻常型银屑病患者皮损和正常对照组的皮肤组织,提取组织RNA,通过RT-qPCR检测miR-146a、基因IRAK1的表达水平。计量资料用均数±标准差(sx±)表示,分析二者相关性,统计分析各组结果是否具有统计学意义;采用Western Blot检测寻常型银屑病皮损和正常对照组皮肤中IRAK1蛋白表达情况。2、通过培养HaCaT细胞系,用miR-146a的模拟物和抑制剂(mi R-146a mimics、miR-146a inhibitor)转染到人永生化表皮细胞株HaCaT细胞,实现miR-146a瞬时过表达或特异性抑制,采用RT-qPCR进一步检测各组miR-146a、IRAK1的表达水平,用Western Blot检测靶基因IRAK1的蛋白表达。3、对HaCaT细胞系分别转染miR-146a mimics、miR-146a inhibitor到HaCaT细胞,一定浓度IL-17刺激后,ELISA法检测各组细胞上清中IL-23表达情况。【结果】1、研究结果表明,RT-qPCR检测30例寻常型银屑病患者的皮损和30例正常对照组皮肤中miR-146a、IRAK1表达水平,miR-146a在寻常型银屑病患者皮损中相对表达量显著高于正常对照组(1.96+0.36,0.92+0.14,t=14.05,P0.01);IRAK1的表达水平显著高于健康对照组(2.56+0.42,0.43+0.15,t=39.45,P0.01),差异具有统计学意义;Pearson相关分析显示,寻常型银屑病患者皮损中miR-146a表达与IRAK1表达无相关性(r=0.230,P=0.221);Western Blot结果显示IRAK1蛋白表达在银屑病组较对照组明显上调。2、体外过表达或抑制miR-146a实验,结果显示与control组比较,miR-146a在miR-146a mimics组细胞内的表达水平显著增加(P0.05),IRAK1 mRNA表达水平显著降低(P0.05),IRAK1蛋白表达下调;而转染miR-146a inhibitor后,inhibitor对miR-146a、IRAK1 mRNA水平和蛋白水平均无显著影响。3、miR-146a mimics、miR-146a inhibitor、mi RNA control转染HaCaT细胞,一定浓度IL-17刺激后,ELISA法检测细胞上清中IL-23表达情况。与control组比较,IL-23在miR-146a mimics组、及mimics+IL-17组均表达下调,差异具有统计学意义(P0.05);与control组比较,IL-23在miR-146a inhibitor组、及mi R-146a inhibitor+IL-17组均表达升高,差异具有统计学意义(P0.05)。【结论】1、寻常型银屑病患者皮损中miR-146a、IRAK1表达升高,提示miR-146a与IRAK1共同作用促进银屑病的发生和发展。2、miR-146a可以抑制IRAK1靶基因的表达,银屑病皮损中IRAK1异常表达升高,银屑病患者皮损中miR-146并未对IRAK1产生有效抑制。3、miR-146a能够显著减少IL-23表达,miR-146a可能在炎症反应中发挥负性调节作用。4、miR-146a可能通过IRAK1介导炎症因子的表达。银屑病患者皮损中过表达的miR-146a并未对IRAK1产生有效抑制作用减少下游炎症因子的表达。
[Abstract]:MicroRNA ( microRNA , miRNA ) is one of the most important diseases in the pathogenesis of psoriasis . In this study , it is possible to study the role of miR - 14s in the pathogenesis of psoriasis , and to provide a new approach to the treatment and prognosis of psoriasis in patients with psoriasis vulgaris . In this paper , we screened and collected skin tissue of 30 patients with psoriasis vulgaris and normal control group , extracted tissue RNA , and detected the expression level of miR - 14I in normal control group by RT - qPCR . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly higher than that in healthy control group ( P 0.05 ) . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly lower than that in healthy control group ( P < 0.05 ) .
【学位授予单位】:广州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R758.63
【参考文献】
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1 邓蕙妍;林玲;周欣;刘炜钰;罗权;;寻常型银屑病患者皮损miR-146a的表达及意义[J];中国中西医结合皮肤性病学杂志;2016年03期
2 罗权;刘炜钰;赵恬;张芳;李薇;林玲;张锡宝;;MiR-146a在寻常型银屑病患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义[J];皮肤性病诊疗学杂志;2015年04期
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,本文编号:1876903
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