bFGF单抗联合放疗抑制小鼠B16黑色素瘤的作用研究

发布时间：2018-05-26 11:07

  本文选题：黑色素瘤 + bFGF单抗　； 参考：《暨南大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的：探讨bFGF单克隆抗体(bFGFmAb)联合放射治疗在荷B16黑色素瘤小鼠体内的抑瘤效应及协同作用机制。 方法：(1)制备腹水型bFGFmAb:复苏培养本室已建株分泌bFGFmAb的杂交瘤细胞。福氏不完全佐剂(IFA)免疫BALB/c小鼠,免疫后第7天,小鼠腹腔注射杂交瘤细胞2×106/只,7～12天腹水形成,抽取腹水。蛋白G亲和层析柱纯化bFGFmAb, SDS-PAGE电泳检测bFGFmAb纯化后纯度,BCA法测定bFGFmAb蛋白原液浓度,间接法ESLIA检测抗体效价,-20℃冻存备用。 (2)建立荷B16黑色素瘤动物模型及分组治疗：复苏培养B16黑色素瘤细胞,取B16细胞4×105/只接种于C57BL/6小鼠右后肢皮下,建立荷B16移植瘤小鼠模型。将32只小鼠随机分为四组,每组8只,分别为对照组、放疗组、bFGFmAb组、bFGFmAb联合放疗组,bFGFmAb组采用瘤周皮下注射bFGFmAb 900μg/只,1次/3天,共3次；放疗组采用6MV、X射线照射瘤体,常规分割放疗5次/周,5Gy/次、共8次、总剂量40Gy;联合治疗组先采用bFGFmAb治疗方法,第9天后联合应用放疗；实验治疗观察20天。 (3)检测瘤体：四组小鼠实验过程中,每两天测量瘤体大小,计算瘤体积；20天后取出瘤体,称瘤重,计算抑瘤率；瘤体送病理检测,TUNEL法检测瘤内B16细胞凋亡率,免疫组化SP法检测瘤内bFGF、VEGF阳性表达率及肿瘤微血管密度(MVD)。 结果：(1)制备腹水型bFGFmAb 14.5ml,效价为1∶1024000。纯化后bFGFmAb效价为1:8192000, SDS-PAGE电泳提示抗体纯度高,BCA法测定抗体浓度为9.593mg/ml,制备的抗体总量为46.048mg。 (2) bFGFmAb组、放疗组、联合治疗组抑瘤率分别为30.49%、12.17%、48.76%,联合治疗组抑瘤率明显高于其它组(P0.05)；与放疗组比较,联合组放射增敏率为2.37。 (3) TUNEL染色显示B16细胞凋亡率对照组为(10.62±1.73)%,bFGFmAb组为(28.45±5.47)%,放疗组为(17.21±2.86)%,联合治疗组为(58.56±6.47)%,联合治疗组较bFGFmAb组及放疗组凋亡明显增加(P0.01)。 (4)免疫组化结果：与对照组比较,放疗组瘤内bFGF、VEGF表达水平下降,bFGFmAb组bFGF表达水平明显下降,联合治疗组bFGF、VEGF表达水平较其它两个治疗组均有显著下降(P0.01)。CD31染色所示瘤内微血管数量,bFGFmAb组血管密度较高,放疗组次之,以联合治疗组最少,坏死区所占比例大,对照组微血管数量多,分布密聚。 结论：bFGFmAb联合放射治疗在荷B16黑色素瘤小鼠体内产生显著协同效应,其机制是通过降低肿瘤组织bFGF、VEGF表达,抑制血管新生,促进肿瘤细胞凋亡,增强放射治疗敏感性,发挥抑瘤作用。本实验为bFGF单抗靶向治疗黑色素瘤提供实验依据。
[Abstract]:Objective: to investigate the anti-tumor effect and synergistic mechanism of bFGF monoclonal antibody (bFGF) combined with radiotherapy in mice bearing B16 melanoma. Methods the ascites bFGFmAb1 was prepared by resuscitation culture of hybridoma cells secreting bFGFmAb. BALB/c mice were immunized with Freund's incomplete adjuvant (IFA). On the 7th day after immunization, the mice were injected intraperitoneally with 2 脳 10 6 hybridoma cells to form ascites for 712 days, and ascites were extracted. The protein G affinity chromatography column was used to purify bFGFmAb.The purity of bFGFmAb protein was determined by SDS-PAGE electrophoresis, and the antibody titer was detected by indirect ESLIA at 20 鈩，

本文编号：1937002