针对丝聚合蛋白基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建及筛选

发布时间：2018-08-06 15:08

【摘要】：目的构建丝聚合蛋白(FLG)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体。方法设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养,获得重组慢病毒载体后,转染目的细胞,实现针对FLG基因的RNA干扰。结果经鉴定该实验的慢病毒载体,对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75%~95%,以RNAi3的沉默效应最佳。结论重组的慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础,并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。
[Abstract]:Objective to construct the lentivirus expression vector of (FLG) gene RNA interference (RNA interference RNAi). Methods the mRNA interference target sequence of human FLG gene was designed and the corresponding double-stranded DNA was synthesized. The shRNA vector was ligated with the PGLV/H1/GFP vector digested by BamH I and EcoRI. The shRNA vector was co-transfected with pHelper 1.0pHelper 2.0 vector into 293T cells and the recombinant lentivirus vector was obtained. The RNA interference against FLG gene was realized by transfection of the target cells. Results the lentivirus vector was identified to interfere with HACAT of human normal skin cells, and the silencing effect of RNAi3 was the best. Conclusion the recombinant lentivirus vector provides a good experimental basis for the further study of FLG gene and can be widely used in gene therapy and gene function study in vivo.
【作者单位】： 山东大学附属济南市中心医院皮肤科;
【基金】：国家自然科学基金(No:81101183)
【分类号】：R758.2;Q782

【共引文献】

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本文编号：2168108