ALA-PDT对健康人及银屑病患者PBMCs的生物效应研究

发布时间：2018-11-09 09:34

【摘要】：观察研究5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT)对体外培养的健康人及银屑病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的生物效应,探讨ALA-PDT治疗银屑病的免疫作用机制、可行性及其最佳的治疗参数,为这一疗法的临床应用提供理论依据。 l、分离和培养银屑病患者及健康人外周血单个核细胞。 2、MTT比色法检测健康人PBMCs分别经0.1 mmol/L、0.6 mmol/L 1.2mmol/L、1.8 mmol/L、3.6mmol/L ALA避光孵育0.5h、1h、3h、5hPDT后的存活情况,并筛选出最佳药物浓度和最适避光孵育时间。 3、Annexin V/PI双染色法结合流式细胞仪检测健康人PBMCs分别经0.1 mmol/L、0.6 mmol/L 1.2mmol/L、1.8mmol/L、3.6mmol/L ALA避光孵育0.5h、1h、3h、5hPDT后的凋亡情况,进一步验证最佳药物浓度和最适避光作用时间。 4、透射电子显微镜下观察健康人PBMCs经0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后细胞超微结构的变化。 5、RT-PCR检测ALA-PDT对银屑病患者及健康人PBMCs表达Th1、Th2相关细胞因子的影响。 1、MTT法显示,健康人PBMCs分别经0.1 mmol/L、0.6mmol/L、1.2mmol/L、1.8mmol/L 3.6mmol/LALA避光孵育0.5h、1h、3h和5h后PDT,结果以0.6mmol/L ALA避光孵育1h的ALA-PDT组细胞存活率最低,与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。 2、与空白对照组相比,健康人PBMCs经0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后明显凋亡Annexin V/PI染色法结合流式细胞仪检测显示该组细胞早期凋亡率为8.5±0.5%(P0.05)。 3、透射电子显微镜下观察到健康人PBMCs经0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后呈现典型凋亡改变,而空白对照组未见凋亡细胞。 4、RT-PCR法检测显示寻常型银屑病患者PBMCs的IFN-γ、TNF-αmRNA表达量与健康人相比显著升高,经0.6 mmol/L ALA避光孵育1h PDT后表达量显著下降,其中IFN-ymRNA表达量降至正常水平；患者PBMCs的IL-4 mRNA表达量较健康人显著降低,经ALA-PDT后显著升高,但未达到健康人水平；患者PBMCs的IL-10mRNA表达量较健康人略有减低,经ALA-PDT后有所升高,但均无统计学意义。 1、健康人PBMCs经0.6mmol/L ALA避光孵育1h后PDT为最佳药物浓度和最适宜避光时间。 2、健康人PBMCs经0.6mmol/L ALA避光孵育1h后PDT可明显促进人外周血单个核细胞的凋亡。 3、银屑病患者外周血单个核细胞经ALA-PDT后由Thl优势应答向Th1/Th2平衡方向转变。
[Abstract]:To observe the effects of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy (5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT) on (peripheral blood mononuclear cells, PBMCs) of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in healthy subjects and psoriatic patients in vitro. To explore the immunological mechanism, feasibility and optimal treatment parameters of ALA-PDT in the treatment of psoriasis, and to provide a theoretical basis for the clinical application of this therapy. L, isolation and culture of peripheral blood mononuclear cells in patients with psoriasis and healthy persons. 2MTT colorimetric assay was used to detect the survival of PBMCs in healthy persons after 0. 1 mmol/L,0.6 mmol/L 1. 2 mmol / L 1. 8 mmol/L,3.6mmol/L ALA incubated with 0. 5 mmol/L,0.6 mmol/L, 1 h, 1 h, 3 h and 5 h PDT, respectively. The best drug concentration and the best incubation time without light were screened out. 3Annexin V/PI double staining and flow cytometry were used to detect the apoptosis of PBMCs in healthy persons after incubated with 0.1 mmol/L,0.6 mmol/L 1.2 mmol / L 1.8mmol / L ALA for 0.5 h and 3 h / L ALA for 5 h respectively. To further verify the optimal concentration of the drug and the optimal time to avoid light. 4. The ultrastructural changes of PBMCs cells were observed under transmission electron microscope (TEM) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h without light for 1 h. The effect of ALA-PDT on the expression of Th1,Th2 related cytokines in PBMCs of psoriatic patients and healthy persons was detected by RT-PCR. PBMCs was incubated with 0. 1 mmol/L,0.6mmol/L,1.2mmol/L,1.8mmol/L 3.6mmol/LALA for 0. 5 mmol/L,0.6mmol/L,1.2mmol/L,1.8mmol/L 3.6mmol/LALA for 3 h and 5 h for PDT, respectively. Results the survival rate of ALA-PDT treated with 0.6mmol/L ALA for 1 h was the lowest, which was significantly different from that of control group (P0.05). 2Compared with the blank control group, the early apoptosis rate of PBMCs was 8.5 卤0.5% (P0.05) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h without light for 1 h. The results of Annexin V/PI staining and flow cytometry showed that the apoptosis rate was 8.5 卤0.5% (P0.05). 3. The typical apoptotic changes of PBMCs were observed under transmission electron microscope (TEM) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h, but no apoptotic cells were found in the blank control group. 4 RT-PCR assay showed that the expression of IFN- 纬 and TNF- 伪 mRNA in PBMCs of psoriasis vulgaris was significantly higher than that in healthy persons, and the expression of PDT decreased significantly after 0. 6 mmol/L ALA exposure to light for 1 h. The expression of IFN-ymRNA decreased to normal level. The expression of IL-4 mRNA in patients with PBMCs was significantly lower than that in healthy subjects, but increased significantly after ALA-PDT, but did not reach the level of healthy people. The expression of IL-10mRNA in patients with PBMCs was slightly lower than that in healthy subjects and increased after ALA-PDT, but there was no statistical significance. 1. The best drug concentration and optimum time for PBMCs were 0.6mmol/L ALA exposed to light for 1 h. 2. The apoptosis of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) could be promoted by PDT after 1 hour of 0.6mmol/L ALA incubation with 0.6mmol/L ALA. 3. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of psoriatic patients changed from Thl dominant response to Th1/Th2 balance after ALA-PDT.
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R758.63

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本文编号：2320033