论文一、表皮松解性掌跖角化症家系突变鉴定 论文二、成骨不全家系致病突变鉴定 论文三、Wilson病家系致病突变鉴定

发布时间：2018-12-15 02:00

【摘要】：背景表皮松解性掌跖角化症(EPPK)是遗传性掌跖角化病的一种亚型,主要的临床表现为掌跖角化过度,在病灶周围有明显的红斑缘,是一种常染色体显性遗传皮肤病,近年来研究表明绝大部分表皮松懈性掌跖角化症是由KRT9基因突变引起,小部分是由于KRT1基因突变所引起目的发现三个表皮松解性掌跖角化症家系的遗传病因,为该病的诊断、预防和遗传咨询提供依据。方法收集3个EPPK家系的临床资料及外周血样本,采用酚-氯仿法提取基因组DNA,对其中一大家系进行微卫星标记连锁分析确定候选基因,对3个家系的先证者进行Sanger测序筛查突变位点,随后针对所检变异进行家系致病突变验证。结果家系1通过经微卫星标记连锁分析和单倍型分析,确定KRT9基因为该家系候选致病基因；在先证者KRT9基因第1外显子检出一错义突变c.491TC(p.L164P),利用限制性酶切分析对家系成员基因分型显示该家系的患者均携带该突变；对家系2和3先证者KRT9基因测序,分别在第1外显子区检出一杂合错义突变c.488 GA(p.R163Q)和c.482 AG(p.N161S)。结论确定KRT9基因变异c.491TC(p.L164P), c.488 GA (p.R163Q)和c.482 AG (p.N161S)分别为这三个家系的致病突变；3个突变均位于KRT9基因第1外显子区,分别为KRT9基因第1外显子c.491TC(p.L164P), c.488GA (p.R163Q)和c.482AG (p.N161S),其中c.491TC (p.L164P)为新生突变,而c.488GA (p.R163Q)和c.482AG (p.N161S)这两个突变已被HGMD数据库收录,为已知致病突变,本研究扩充了EPPK致病突变数据库并进一步证实该区域是EPPK突变热点区域。目的在三个中国人成骨不全家系中进行致病基因突变检测,明确致病原因。方法酚-氯仿法提取三个家系先证者及家系成员外周全血基因组DNA, PCR扩增I型胶原基因COL1A1和COL1A2编码区及外显子／内含子交界区,PCR产物直接进行Sanger测序；通过PCR-高分辨熔解曲线法进行家系样本突变鉴定。结果在三个家系的先证者的COL1A1基因序列中分别检测到突变c.2560GA (p.G854S), c.358CT(p.R120*)和c.814GA(p.G272S),其中c.358CT(p.R120*)和c.814GA (p.G272S)为新生突变；HRM家系突变验证发现每个家系内的患者均携带相同的突变,但家系非OI患者和群体正常对照不携带突变,HRM基因分型结果与测序鉴定结果一致。结论本研究发现了两个新生突变c.358CT (p.R120*)和c.814GA (p.G272S)并建立基于PCR-DNA测序和PCR-高分辨熔解曲线分析的成骨不全症基因诊断技术平台,为突变的家系验证和产前基因诊断奠定了基础。目的：在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定,为该家系提供产前基因诊断。方法：酚-氯仿法提取外周全血或妊13周胎儿绒毛组织基因组DNA；利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析；针对先证者携带的突变位点,应用聚合酶链反应(PCR)-高分辨熔解曲线(HRM)方法对先证者家系4名成员进行突变鉴定,并在此基础上为患儿母亲提供产前基因诊断。结果：先证者ATP7B基因第8外显子存在纯合致病突变c.2333GT(p. R778L);该家系5名成员和4名群体正常样本分属于3种不同熔解曲线。HRM分析结果与测序结果一致,即：患儿本人为R778L的纯合子,其父母、姐姐和母亲产前诊断的胎儿均为突变杂合子,4名群体正常对照为纯合野生型。结论：在一个WD家系中检测到ATP7B基因热点突变c.2333GT(p. R778L),并针对该突变建立了一种基于PCR-HRM技术的快速突变鉴定方法,成功为家系提供产前基因诊断。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.5

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1 周飞红;;合并内脏恶性肿瘤的掌跖角化症[J];国外医学.皮肤病学分册;1988年04期

2 周沛华,蒋乔仓;点状掌跖角化症一例[J];中华皮肤科杂志;1995年03期

3 李明山;掌跖角化症2例[J];医学理论与实践;1995年06期

4 吴e，

本文编号：2379743