下调糖蛋白130基因表达对HaCaT细胞体外增殖及IL-6水平的影响

发布时间：2019-01-30 21:21

【摘要】：目的探讨下调糖蛋白(glycoprotein,gp)130基因表达对人永生化角质形成细胞株(human immortal keratinocyte colony HaCaT cells,HaCaT)细胞体外增殖及IL-6水平的影响。方法设计并合成三条gp130的siRNA,转染HaCaT细胞后,从mRNA表达、蛋白质水平上检测gp130,筛选出最适siRNA序列及浓度用于后续实验。转染HaCaT细胞24h,48h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞增殖周期;荧光定量PCR法检测mRNA表达;Western blotting印迹法检测蛋白水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-6水平。结果 siRNA-1与siRNA-NC、空白对照组相比,HaCaT细胞增殖率及增殖周期在24h时差异均无统计学意义(均P0.05),48h时差异均有统计学意义(均P0.05);IL-6mRNA表达、蛋白水平在转染HaCaT细胞24h时差异均无统计学意义(均P0.05),48h时差异均有统计学意义(均P0.05)。结论下调gp130基因可抑制角质形成细胞增殖,影响角质形成细胞增殖周期,并可抑制IL-6的表达和分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of down-regulation of glycoprotein (glycoprotein,gp) 130 gene expression on the proliferation and IL-6 level of human immortalized keratinocytes (human immortal keratinocyte colony HaCaT cells,HaCaT) cells in vitro. Methods three gp130 siRNA, were designed and synthesized to transfect HaCaT cells. The optimal siRNA sequence and concentration were screened from mRNA expression and detection of gp130, at protein level for subsequent experiments. The proliferation of HaCaT cells was detected by flow cytometry, and the expression of mRNA by; Western blotting was detected by fluorescence quantitative PCR. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the level of IL-6 in the supernatant. Results compared with the control group of siRNA-NC, the proliferation rate and cycle of HaCaT cells in siRNA-1 had no significant difference at 24 h (P0.05), but there were significant differences at 48h (P0.05). There was no significant difference in IL-6mRNA expression and protein level at 24 h after transfection of HaCaT cells (P0.05), but there was significant difference at 48h (P0.05). Conclusion down-regulation of gp130 gene can inhibit the proliferation of keratinocytes, affect the proliferation cycle of keratinocytes, and inhibit the expression and secretion of IL-6.
【作者单位】： 河北大学附属医院皮肤科;沧州市中心医院皮肤科;
【分类号】：R758.63

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本文编号：2418538