单纯疱疹病毒感染的实验室检测及其抗病毒抑制疗法的应用

发布时间：2019-04-22 18:34

【摘要】：单纯疱疹病毒(HSV)基因组大小约152kb,是较大的双链DNA病毒。它可以分为HSV-1和HSV-2两个亚型,这两型病毒基因有50%左右的同源性。HSV主要经过皮肤、黏膜或破损处进入人体内。首先在表皮或真皮细胞内复制。病毒在局部充分复制后感染感觉神经或自主神经未稍,在被感染细胞内处于抑制状态,被感染细胞的存活与功能不受影响,病毒沿神经轴索进入神经节内的神经细胞中,该过程称为潜伏。在各种诱发因素如焦虑、精神创伤、受凉、日晒、吹风、创伤、感染、药物过敏、高热、月经、妊娠等破坏身体生理平衡的因素作用下,神经细胞中出现病毒增殖所需的特异性转录酶,激活病毒基因,病毒开始复制,有时可形成疱疹性损害,从而表现出疱疹症状,称为复发。 HSV-1主要是通过呼吸道、皮肤和黏膜密切接触传播引起口唇黏膜、鼻前庭、眼结膜、咽喉部的炎症及疱疹。HSV-2主要经性行为传播,生殖器接触而感染,常潜伏在骶神经节内,临床主要表现为生殖器疱疹。该病归为性传播疾病,严重影响人们的心理健康,患者往往伴有严重的焦虑、忧郁、睡眠障碍等心理问题,严重影响机体的免疫功能及夫妻之间的关系。特别是被感染的女性患者,由于女性生殖器解剖部位的隐蔽性,使得生殖器疱疹感染更不易被发现,并且有感染新生儿的危险,可造成早产、死产、畸胎、胎儿发育异常等。生殖器疱疹的临床分型可分为初发性、复发性、亚临床HSV激活等类型,此外还存在一些特殊类型,临床表现具有各自特点。亚临床HSV激活是指HSV在体内被激活,无临床表现,但可间歇排毒。病毒激活可同时发生在多个解剖部位(如阴道、子宫颈和直肠等),本型患者可从外观正常的受累部位分离出病毒。决定传播的主要因素是传播者的HSV-2的自然毒力。无症状HSV排泌可以发生在子宫颈、外阴、肛门、尿道、阴茎周围皮肤、肛周区域,伴发HSV排泌可发生于身体其它解剖部位。亚临床HSV激活患者的最大危害是传染性伴。研究显示,70%的传染发生在亚临床HSV激活患者性接触后,且女性更容易被传染。因而,控制好亚临床HSV激活,对预防生殖器疱疹的传播有着重要的意义。实验室检查可以评估皮损发作时的潜在传染性,辨别人们亚临床传播感染的风险,挑选哪些妇女有传染给新生儿的风险以及确定HIV感染需要抗病毒治疗的用药。病毒感染的检测包括直接从皮损处检测出病原体和间接的相关抗体检测,目前实验室常用检查方法主要包括显微镜检法、抗体检测、病毒培养法及核酸放大测试法(NAAT)。近年来,生殖器疱疹的发病率逐渐上升,如何诊断和有效控制本病传播成为各国研究的热点问题。生殖器疱疹的检测及及时采取治疗措施是我们从事临床工作医务工作者不可忽视的重要内容。因而本研究主要从检测方法入手,以期为临床治疗及预防疾病的传播提供参考。目的：单纯疱疹病毒感染引起的生殖器疱疹传播速度快,与亚临床HSV排泌密切相关,为了有效控制生殖器疱疹,从预防生殖器疱疹传播角度出发,本研究通过比较ELISA法、病毒培养法及PCR法,从不同的标本检测方法的敏感性入手,寻找检测亚临床HSV排泌的临床可行方法,从而为临床用药,控制亚临床HSV排泌,减少疾病传播提供依据。方法： 1.选取86例生殖器疱疹患者,取水疱或糜烂部位标本并抽取外周血,分别采用ELISA法、病毒培养法及PCR法进行检测,并抽取30例健康体检者血清作ELISA法的对照；取30例非HSV病毒感染引起的水疱或糜烂、溃疡标本,作为PCR对照,比较三种方法检测不同标本的敏感性,寻找适合检测亚临床HSV排泌的方法。 2.选取137例来院进行抗病毒治疗的复发性生殖器疱疹患者,分2组,分别口服阿昔洛韦和伐昔洛韦治疗3个月,每周取宫颈或尿道分泌物进行PCR法检测,并观察用药时间与亚临床HSV排泌的关系。 3.统计分析：用SPSS13.0统计软件对所有试验数据进行统计分析,计量资料数据均用均数±标准差(x±s)表示。将检测得到的阳性率进行x2检验分析,IgM/G与病程及复发频率采用Spearman相关性分析；PCR法与细胞培养法的比较作连续性校正,用McNemar检验,PCR法检测不同样本的检出率比较用x2检验。两治疗组间一般情况的比较(年龄、病程)运用t检验；两组治疗前后复发次数的比较及治疗过程中的复发率应用x2检验；无症状HSV排泌时间和病程的关系应用Pearson相关分析；不良反应比较应用校正x2检验；均采用双侧检验,检验水准为α=0.05。结果： 1.IgM与病程的相关关系具有统计学意义(Spearman相关系数r=-0.570,P0.001), IgG与病程的相关关系具有统计学意义(Spearman相关系数r=0.334,P0.001); IgM与复发频数的相关关系具有统计学意义(Spearman相关系数r=-0.542, P0.001), IgG与复发频数的相关关系具有统计学意义(Spearman相关系数r=0.284,P=0.009)。 2.病毒培养法检测标本出现病变者60例,阳性率71.4%(60/84)。其中有水疱者HSV培养阳性率为81.8%(36/44),明显多于糜烂溃疡者(60%,24/40),差异据有统计学意义(x2=4.89,P=0.027)。 3.PcR法检测结果阳性79例,阳性率94.0%(79/84),和病毒培养相比,差异具有统计学意义(为配对资料,用McNemar检验作连续性校正,x2=17.05,P0.001),其中有水疱者阳性检出率为97.7%(43/44),与糜烂或溃疡者阳性检出率(90%,36/40),比较差异无统计学意义(作连续性校正,x2=1.068,P=0.301)。 4. ELISA法检测,HSV-2 IgG阳性率(78/84)与PCR法检测(79/84)差异无统计学差异(χ2=0.359,P=0.549),HSV-2IgG阳性率与病毒培养法检测(60/84)差异具有统计学意义(x2=11.432,P=0.001)。水疱标本的病毒培养(36/44)和PCR检测(43/44)阳性率均较高(81.8%、97.7%),糜烂、结痂标本检测中PCR阳性率(36/40,90%)高于病毒培养(24/40,60%),差异具有统计学意义(x2=9.600,P＝0.002)。 5.应用PCR法检测病人宫颈或尿道无症状排毒情况显示：阿昔洛韦治疗组平均排毒持续约12周,伐昔洛韦治疗组平均排毒持续约9周,两组中出现无症状排毒的病人方差齐(F=0.468,P=0.496),两组无症状排毒的病人中排毒持续时间比较,差异具有统计学意义(t=5.21,P0.001)。PCR法较易操作,实验条件相对容易满足,对非水疱标本敏感性高,适合临床推广。结论： 1.在临床检测中,对于复发性生殖器疱疹患者,ELISA法检测比较适合,具有参考价值,但数值大小对临床指导意义不大,不适合检测亚临床感染或病毒是否有复制。病毒培养耗时、费用高、实验技术要求高,不适合临床诊断,特别是非水疱标本检出率较低。PCR法检测敏感性高对病毒诊断具有特异性,可应用于临床诊断,特别是非水疱或糜烂标本,诊断检出率较高,具有省时的优点。因而PCR技术可以用于检测临床HSV无症状排泌或亚临床感染。 2.应用PCR法检测抗病毒药物治疗生殖器疱疹的亚临床HSV排泌情况,提示盐酸伐昔洛韦片不仅可以有效预防频发性生殖器疱疹复发,而且可以减少生殖器部位的无症状排毒情况。建议对每年复发次数频繁的患者建议用大剂量伐昔洛韦片至少维持治疗三个月,以减少复发及无症状排毒情况。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R752.1

【参考文献】