SATB1与黑素瘤生长和转移的相关性研究

发布时间：2019-09-17 22:29

【摘要】：皮肤黑素瘤(malignant melanoma)起源于皮肤黑素细胞,恶性程度极很高,发生发展过程中涉及大量基因异常表达,具体机制尚不清楚。SATB1是一种核基质附着区结合蛋白,近来发现在乳腺癌等多种恶性肿瘤表达水平显著升高,可能对肿瘤生长和转移起促进作用,而在黑素瘤的表达和作用尚未见报道。本研究通过检测SATB1在黑素瘤的表达状况及其表达水平,探讨对黑素瘤生长和转移能力的影响,初步揭示SATB1与皮肤黑素瘤的相关性。 第一部分：SATB1在黑素瘤细胞系及组织的表达 采用半定量RT-PCR法,以2例正常黑素细胞和乳腺癌细胞系MDA-MB-231为对照,比较SATB1 mRNA在人黑素瘤细胞系A375、M14和MV3的表达水平。结果显示,与MDA-MB-231细胞相似,A375和MV3细胞高水平表达SATB1 mRNA, A375细胞表达水平最高,M14细胞表达水平稍低,而2例正常黑素细胞均不表达。 采用蛋白印迹法,以正常黑素细胞为对照,比较SATB1在上述黑素瘤细胞系的表达水平；以6例色素痣为对照,比较SATB1在8例黑素瘤组织标本的表达水平。结果显示,正常黑素细胞不表达SATB1,而黑素瘤细胞系A375、M14和MV3均高水平表达SATB1;色素痣和黑素瘤组织均表达SATB1,但黑素瘤(1.10±0.32)的表达水平显著高于色素痣(0.53±0.28)(P0.05),差异有统计学意义。 SATB1的mRNA和蛋白质在黑素瘤表达水平均异常升高,提示其可能对黑素瘤的发生和发展起促进作用。 第二部分：抑制SATB1表达对A375细胞增殖和侵袭转移的影响 构建SATB1的RNAi十扰质粒表达载体,转染高水平表达SATB1的黑素瘤A375细胞系并筛选稳定表达克隆,在mRNA和蛋白质水,平均显示SATB1的表达水平明显下降(分别为未转染组细胞的23.21%和34.57%),即对干扰前后不同SATB1表达水平A375细胞的增殖能力和侵袭转移能力进行了比较性研究。 在增殖能力方面,首先在体外细胞计数并绘制增殖曲线、流式细胞术分析细胞周期,然后在动物体内建立皮下移植瘤模型,比较成瘤潜伏期、肿瘤生长速度和移植瘤质量。结果显示,低水平表达SATB1的A375细胞在24 h、48 h和72 h的细胞数明显少于高水平表达SATB1者,且随着时间的推移差距逐渐增大,增殖曲线较为平坦；在动物体内形成移植瘤的成瘤潜伏期(8.17±2.86天),较高水平表达SATB1的A375细胞的成瘤潜伏期(4.83±1.17天；5.33±0.82天)明显延长(P0.05),生长曲线较为平坦,且形成的移植瘤质量(0.65±0.36 g)显著低于高水平表达SATB1的A375细胞(1.44±0.75 g；1.52±0.74 g)(P0.05),差异有统计学意义。无论在体外还是动物体内,抑制高水平表达的SATB1均可导致A375细胞的增殖能力明显下降,提示SATB1的表达可能对黑素瘤的增殖能力具有促进作用,抑制其表达可能对黑素瘤的增殖能力具有减弱作用。细胞周期分析显示虽G1期和凋亡细胞比例增高而G2和S期细胞比例稍低,但差异无统计学意义,其机制有待进一步研究。 在侵袭转移能力方面,首先在体外比较不同SATB1表达水平的A375细胞穿过重建基底膜的能力,然后建立裸鼠黑素瘤肺转移模型,比较不同SATB1表达水平的A375细胞在体内形成肺转移灶的能力。结果显示,低水平表达SATB1的A375细胞穿过重建基底膜的细胞数(3.92±2.71)明显少于高表达的(31.92±6.93；35.83±7.46)；SATB1表达受到抑制的A375细胞在裸鼠肺部形成的转移灶面积比(0.08±0.05)较未转染组(0.37±0.22)和空白组(0.40±0.12)明显减小(P0.05),转移灶明显缩小,差异具有统计学意义。体外和动物体内实验结果提示,SATB1的表达可能对黑素瘤的侵袭转移具有促进作用,抑制其表达可能对黑素瘤的侵袭转移能力具有减弱作用。 结论 SATB1在黑素瘤细胞系和组织标本的表达水平异常升高,抑制SATB1的表达,可以明显降低黑素瘤细胞的增殖能力、侵袭转移能力,提示SATB1可能对黑素瘤的生长和侵袭转移具有促进作用；抑制SATB1的表达能部分逆转黑素瘤的恶性生物学行为,表明SATB1可能是一个具有良好应用前景的黑素瘤治疗靶点。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R739.5

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本文编号：2537110