Slit2在皮肤癌成癌中的作用研究

发布时间：2017-03-19 07:03

  本文关键词：Slit2在皮肤癌成癌中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：皮肤癌的发病率在全球逐年增多，逐渐引起人们的关注。在美国，仅鳞状细胞癌的患者每年都会增加八十多万人，其发病是其它肿瘤的三倍，且持续上升，每年达总人口的百分之一。对于皮肤癌的治疗目前并没有什么好的解决办法，解决肿瘤疾病是人类面临的巨大的挑战。同时，皮肤癌容易形成转移，控制肿瘤的转移也极其重要。因此，研究皮肤肿瘤的发病过程非常具有临床意义。 Slit是神经导向因子家族的一员，它通过与其受体Robo（Roundabout）结合，产生Slit/Robo信号，调节神经元、白细胞及内皮细胞的迁移。有大量的文献报道，Slit在肿瘤的生长和转移中有重要的作用。目前研究表明Slit2与结直肠癌、卵巢癌、神经胶质瘤、肾细胞癌、肺癌等的发生发展有关。部分研究者提出Slit2促进肿瘤的生长，也有研究者提出Slit2可以抑制肿瘤的生长。因此，Slit2对肿瘤肿瘤生长及转移的作用尚有争议。而且，Slit2体内对皮肤癌的作用目前还没有报道。 那么，Slit2是否对皮肤肿瘤的生长起作用呢？如果有作用，是如何发挥作用的呢？为此我们做了以下实验解决该问题。 我们取39例临床样本，通过免疫组织化学的方法检测Slit2的表达情况。发现Slit2在正常及增生期组织不表达，在原位癌及鳞癌中表达，Collagen Ⅳ在正常及增生组织的基底膜部位表达完整，呈线状，而在原位癌组织中表达不完整，表明基底膜已有断裂，在鳞癌期的组织中Collagen Ⅳ在基底膜的表达已经广泛缺失。此结果提示Slit2与可能促进了皮肤基底膜的破裂。因此，为了验证Slit2对肿瘤的作用，我们建立了DMBA/TPA的化学诱导的二阶段皮肤癌模型，同时诱导Slit2-Tg小鼠和野生型小鼠，研究Slit2在皮肤癌成癌过程中的作用。我们研究发现Slit2促进了皮肤癌的病理进程，促进了基底膜的破裂。同时，Slit2促进了肿瘤细胞中的金属基质蛋白酶Ⅱ的表达。而且发现肿瘤组织中以Robo1表达为主，说明Slit2可能通过受体Robo1起作用。为了验证Slit2对基底膜的作用，我们通过R5阻断皮肤癌细胞株Slit2/Robo1信号通路，研究Slit2对皮肤癌细胞株的侵袭能力的影响，并证实Slit2能够促进皮肤癌细胞的侵袭能力。总之，我们的结果提示，，Slit2通过促进皮肤癌细胞的MMP-2的表达促进了化学诱导的皮肤癌的基底膜的破裂，促进皮肤癌的发生发展。
【关键词】：
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料与方法13-26
• 1 材料13-15
• 1.1 临床实验样本的收集13
• 1.2 实验动物13
• 1.3 实验试剂及仪器13-15
• 2 方法15-26
• 2.1 Slit2-Tg 小鼠的基因型鉴定15-18
• 2.2 化学诱导小鼠皮肤癌模型的建立18-19
• 2.3 HE 染色19-20
• 2.4 PAS 染色20-21
• 2.5 免疫组织化学染色（IHC）21-22
• 2.6 免疫荧光染色（IF）22-23
• 2.7 细胞迁移实验（cell migration assay）23-24
• 2.8 细胞侵袭实验（cell invasion assay）24-26
• 第三章 实验结果26-41
• 第一部分 Slit2 及Ⅳ型胶原在皮肤不同病理进程中的表达26-27
• 1. Slit2 在皮肤癌病理进程中的表达26-27
• 2. Ⅳ型胶原在皮肤癌病理进程中的表达27
• 第二部分 Slit2 促进化学诱导的皮肤癌成癌过程27-33
• 1. 化学诱导皮肤癌模型构建成功27-28
• 2. Slit2-Tg 小鼠的肿瘤数目显著增加28
• 3. Slit2-Tg 小鼠的肿瘤体积显著增加28-29
• 4. Slit2 增加化学诱导的皮肤成癌过程的表皮厚度29-30
• 5. Slit2 促进化学诱导的皮肤癌表皮细胞增殖30-31
• 6. Slit2 增加化学诱导的皮肤癌血管微密度31-32
• 7. Slit2 促进化学诱导的皮肤癌病理进程32-33
• 第三部分 Slit2 促进皮肤基底膜的破裂33-38
• 1. Slit2-Tg 小鼠和野生型小鼠皮肤不同病理进程的 PAS 染色33-34
• 2. Slit2-Tg 小鼠和野生型小鼠皮肤不同病理进程的Ⅳ型胶原染色34-35
• 3. Slit2 在皮肤癌病理进程中起着重要作用35
• 4. 基底膜的破裂与 Slit2 的表达相关35-36
• 5.金属基质蛋白酶Ⅱ在皮肤癌病理进程中的表达36-38
• 第四部分 Slit2 对皮肤癌细胞株侵袭和迁移能力的影响38-41
• 1. A431 细胞分泌 Slit2 蛋白并表达 Robo138-39
• 2. Slit2 促进皮肤癌细胞 A431 的侵袭39-40
• 3. Slit2 促进皮肤癌细胞 A431 的迁移40-41
• 讨论41-44
• 参考文献44-48
• 在校期间发表的学术论文48-49
• 致谢49-51

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本文编号：255668