人表皮光老化的蛋白质组学研究

发布时间：2020-02-01 21:02

【摘要】： 目的:人表皮光老化的机制不明。本文以老年人的正常表皮为研究对象,分析曝光部位与非曝光部位的表皮差异蛋白,探讨角质形成细胞在光老化过程中的作用及分子机制,为揭示衰老的本质,指导皮肤美容奠定基础。方法:收集老年人曝光部位和非曝光部位的正常皮肤,液氮保存。37℃生理盐水中快速复温,用DispaseII分离出表皮,提取表皮总蛋白质,并进行2-DE分离,获得表皮双向凝胶电泳图谱,PDQUEST软件进行图像分析,经强度校正、背景消减、点检测、匹配、ID校正,确定凝胶上差异蛋白点,挑选其中的蛋白点进行MALDI-TOF质谱分析及数据库查询,鉴定差异表达蛋白;最后用Western-blotting检测不同部位蛋白的表达情况,验证差异表达蛋白。结果:本课题成功建立和优化了人表皮双向电泳技术,获得了清晰、重复性高的表皮双向电泳图谱。经PDQUEST软件分析后,曝光组表皮蛋白质点数为536±17,非曝光组表皮蛋白质点数为528±15,比较两组图谱共确定差异点31个,其中15个蛋白点在曝光组中高表达,5个点特异表达;8个蛋白点在非曝光组中高表达,3个点特异表达。取其中差异明显的10个点进行质谱分析及数据库查询,成功鉴定了5个差异表达蛋白,发现热休克蛋白27(HSPB1)、膜联蛋白A2(ANXA2)、丝裂原激活的蛋白激酶3(MK03)在老年人曝光部位的表皮中高表达,角蛋白80(K2C80)仅在老年人曝光部位表皮中表达,而谷胱甘肽S转移酶A2(GSTA2)在非曝光部位表皮中高表达,并通过Western-blotting验证了热休克蛋白27、膜联蛋白A2在两组表皮中表达的差异性。提示这5种蛋白质均与皮肤的光老化有着密切关系。结论:老年人正常皮肤曝光部位和非曝光部位的表皮存在差异蛋白,经分析和鉴定的5种蛋白质均通过各种途径维持细胞的正常功能,抑制炎症反应及细胞的凋亡,与皮肤的光老化有密切的关系,为进一步研究表皮细胞在光老化过程中的作用及分子机制奠定基础。
【图文】：

双向电泳,图谱,蛋白质,表皮

3 结果3.1 两组表皮蛋白质 2-DE 分离结果经计算机分析后，两组双向电泳图谱重复率高，，重复性分别达到 84.5%（曝光组）和 83.4%（非曝光组）。蛋白质斑点分子量在 10～100 KD,pI4～8，经 PDQUEST7.4 软件分析后，曝光组表皮蛋白质点数为 536±17，非曝光组表皮蛋白质点数为528±15，比较两组图谱共确定差异点 31 个，其中 15 个蛋白点在曝光组中高表达，5 个点特异表达；8 个蛋白点在非曝光组中高表达，3 个点特异表达。取其中差异明显的 10 个点进行质谱分析。见图 1。pH4～8pH4～8

图 3：1 号蛋白点的 Mascot 搜索结果Fig 3：Mascot researching result of protein spot 1ewUMAN Score: 120 Expect: 2e-08pe II cytoskeletal 80 OS=Homo sapiens GN=KRT80 PE=1 SV=ass (Mr): 51007; Calculated pI value: 5.58ST search of K2C80_HUMAN against nred sequence string for pasting into other applications: Homo sapiensifications: Carbamidomethyl (C)odifications: Oxidation (M)by Trypsin: cuts C-term side of KR unless next residue is Pf mass values searched: 20f mass values matched: 16
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R758.1

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