Hsa-miR-100-5P在皮肤鳞状细胞癌细胞及砷致HaCaT细胞恶性表型细胞中的表达及意义

发布时间：2020-03-24 13:55

【摘要】：目的:分析hsa-miR-100-5P在皮肤鳞状细胞癌细胞(cSCC细胞)及砷致HaCaT恶性表型细胞(AS-TM细胞)中的表达,以验证AS-TM细胞作为砷诱发皮肤癌模型的可能性,并探讨砷致HaCaT细胞恶性转变与皮肤鳞状细胞癌形成之间的共同分子基础,为皮肤鳞状细胞癌的诊断和治疗提供新靶点。方法:1.制备AS-TM细胞:HaCaT细胞培养在含100nM三氧化二砷培养液180天后收集细胞后制备成AS-TM细胞,软琼脂克隆形成实验计算克隆形成率;2.检测hsa-miR-100-5P的表达:正常HaCaT细胞、AS-TM细胞及cSCC细胞同时进行传代培养,取对数生长期的3种细胞,分为三组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测hsa-miR-100-5P在人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)、皮肤鳞状细胞癌细胞(cSCC细胞)及砷致HaCaT恶性表型细胞(AS-TM细胞)中的表达。结果:1.HaCaT细胞在含砷的培养基内培养180天后,形态学上有了明显的变化。显微镜下见细胞的体积变小,细胞形态多种变化,频繁出现多核巨细胞;无砷对照组HaCaT细胞仍是上皮样细胞形态,软琼脂克隆形成实验AS-TM细胞组克隆形成明显多于HaCaT细胞组,HaCaT细胞组和AS-TM细胞组单克隆形成率分别为0.12‰和0.52‰,两组间有显著性差异(P〈0.05)。2.RT-PCR结果显示,三组细胞进行单因素ANOVA分析,差异有显著性(F=44.866,P=0.000*)。采用LSD-t法进行多重比较结果显示,与HaCaT细胞相比,cSCC细胞中hsa-miR-100-5P显著上调(LSD-t=8.344,P=0.000*),cSCC细胞和HaCaT细胞相对表达量分别为(2.445±0.261/1.000±0.000);与HaCa T细胞相比,AS-TM细胞中hsa-miR-100-5P也显著上调(LSD-t=3.893,P=0.008*),AS-TM细胞和HaCaT细胞相对表达量分别为(1.636±0.192/1.000±0.000),并且cSCC细胞与AS-TM细胞比较,hsa-miR-100-5P也显著上调(LSD-t=4.452,P=0.004*);结果证实cSCC细胞、AS-TM细胞与正常HaCaT细胞相比,hsa-miR-100-5P的表达均上调。结论:1.hsa-miR-100-5P在砷致HaCaT细胞恶性表型细胞与皮肤鳞状细胞癌细胞中均显著上调,表明砷致HaCaT细胞恶性表型细胞与皮肤鳞状细胞癌细胞的miRNA表达有相似性,证实砷致HaCaT细胞恶性表型细胞作为砷诱发皮肤癌的细胞模型是可靠的。2.hsa-miR-100-5P可能在砷致HaCaT细胞恶性转化过程中和皮肤鳞状细胞癌的发生过程中均发挥一定作用,有可能成为皮肤鳞状细胞癌诊断及治疗的潜在靶点。
【图文】：

HaCaT细胞在含100nM三氧化二砷的培养基内培养180天后，形态学上有了明显的变化，，显微镜下见细胞的体积变小,形态多种多样，频繁出现多核巨细胞（箭头所指），而不含砷培养基培养的HaCaT细胞仍是上皮样细胞形态（见图1）。HaCaT细胞组（×200） AS-TM细胞组（×200）图 1 砷长期作用对 HaCaT 细胞形态的影响2. 低浓度砷剂长期作用对 HaCaT 细胞克隆形成的影响2.1 软琼脂克隆形成实验显示AS-TM细胞组克隆形成明显多于HaCaT细胞组（见图

砷长期作用对HaCaT细胞克隆形成的影响
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.5

【参考文献】

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本文编号：2598415