CD147siRNA转染对银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和基质黏附能力的影响

发布时间：2020-03-24 18:58

【摘要】： 目的 研究CD147siRNA转染对寻常型银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和细胞外基质黏附能力的影响。旨在进一步明确CD147分子在银屑病发病中的作用机制,探讨将CD147作为靶分子,运用siRNA技术对银屑病进行基因治疗的可行性。 方法 1、收集门诊确诊为寻常型银屑病患者10例,抽取外周血20 mL,密度梯度离心法分离外周血单一核细胞(PBMC);通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)和人重组白细胞介素2(rIL-2)共同培养5天后采用流式细胞仪检测T细胞纯度为(92.88±1.81)%; 2、将化学合成的CD147siRNA电转染至T细胞中,采用半定量RT-PCR法检测转染后96小时内转染细胞中CD147 mRNA表达水平的变化; 3、采用MTT法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后T细胞增殖水平的变化; 4、运用流式细胞仪法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞活化标记分子CD25表达的影响; 5、采用基质黏附实验检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞胞外基质黏附能力的影响。 结果 1.转染CD147siRNA 1 24、48和72 h后,T细胞中CD147 mRNA表达水平均降低(P均＜0.05),以转染后48小时下降最为显著(P＜0.001),干扰效率为(62.87±5.5)%;而转染后96 h恢复至接近转染前水平(P＞0.05);转染CD147siRNA 2 48小时后,CD147mRNA表达水平降低,干扰效率为(10.2±3.1)%(P＜0.05),其余时间点无显著下降(P＞0.05); 2.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的增殖能力显著降低(P均＜0.001),其抑制率分别为(44.5±3.13)%、(50.7±3.5)%、(53.98±4.15)%; 3.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞表面CD25分子的表达水平由(80.2±4.8)%、(81.6±3.35)%、(83.5±4.1)%下降到(47.23±3.65)%、(31.5±4.22)%、(23.05±4.15)%(P均＜0.001); 4.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的胞外基质黏附能力显著降低(P值分别＜0.01、＜0.001、＜0.001),下降率分别为(29.8±4.66)%、(43.53±3.88)%、(56.5±4.13)%。 结论 1.建立了针对人外周血T细胞进行siRNA瞬时转染的实验方法; 2.CD147分子与银屑病患者外周血T细胞的增殖、活化和基质黏附能力相关,可能是一种新的银屑病治疗靶分子。
【图文】：

2.1不同siRNA剂量的转染效率分别电转染非特异性荧光标记siRNAO、1、2、3、4和5林L(终浓度<200nM)，，4小时后流式细胞仪检测T细胞中阳性荧光细胞数目，见图1。选取转染效率最高时的siRNA量5林L(2林g)为实验最适剂量。I匹nsFL2林LnsFLS归OUnOS扫OCnOS扫OUnO气石护念4门lseeseseseseseseseseseses日UC甘一叫一峙月q

本文编号：2598721