IFN-γ诱导人黑素细胞CD40的表达及其意义和芦荟素对Melan-a黑素细胞株黑素合成及其相关基因表达的研究

发布时间：2020-05-01 20:15

【摘要】： 黑素细胞是皮肤内一种能产生黑素的树突状细胞，它来源于外胚层的神经嵴，它和皮肤色素有关。近年来对黑素细胞的研究，特别是对其生物学特性及细胞生化方面的研究已经较为深入，值得注意的是临床上许多与黑素细胞病变或损伤的皮肤病均与免疫有着密切关系，加之黑素细胞本身又能表达某些重要的抗原分子，因此继续深入探究黑素细胞的免疫学特性具有十分重要的意义。有关黑素细胞免疫学研究的报道较少，，1992年Le Poole用免疫组化的方法就证实体外培养的黑素细胞表面可以表达MHC-Ⅰ／Ⅱ、黏附分子ICAM-1和Fc受体，并分泌IL-1、IL-6。黑素细胞培养基中加入IFN-γ、TNF-α、IL-1α还能显著上调其ICAM-1表达。流式细胞术和RT-PCR进一步证实黑素细胞自身能分泌炎症因子IL-1α和IL-1β。 1993年，Poole等根据黑素细胞具有树突状外观，在皮肤中占据了战略性位置(strategic position)和具有吞噬功能而猜想它是否具有抗原递呈的能力。进一步的实验的确证实：体外培养的人黑素细胞经IFN-γ处理后，能将分枝杆菌HSP 65Kda蛋白和完整的麻风杆菌超声粉碎混合物以抗原特异性和HLA-Ⅱ限制性方式传递给T细胞，并激发其增殖。另外，经以上抗原刺激后的T细胞与黑素细胞再次作用，也能以HLA-Ⅱ限制性方式刺激T细胞的克隆性活化。虽然Poole并未对其发生机理进行探讨，但是在某种意义上，根据他的实验结果，可以推测黑素细胞可能是一种具有抗原递呈功能的异质性APC。本研究的第一部分：目的为探讨γ-干扰素(IFN-γ)体外诱导人黑素细胞表面CD40分子的表达及其意义。方法采用常规南京医科大学博士学位论文分离培养人黑素细胞，流式细胞仪测定 uN－Y处理前后细胞表面 CD4 0等免疫分子表达；混合淋巴细胞反应评价黑素细胞对同种异体T淋巴细胞的刺激能力；ELISA检测培养上清u书、IL＜0、 L十2的浓度。结果为体外培养的人黑素细胞表面表达少量m们分子；不同浓度的 Y－干扰素（IFN－Y）处理黑素细胞 24h，48h，72h后，能显著促进其 CD40的上调（p＜0．01），且 24h 处理组的黑素细胞CD4 0的表达量和rN－V的浓度呈直线相关。经 IFN－Y诱导后的黑素细胞形态有所变化，刺激同种异体淋巴细胞的能力也显著增力。，3 0 OIU／mllF N一 Y处理的黑素细胞 7 2 ，J、时刺激指数门）可达到峰值。黑素 i田胞经 r刚－Y作用后，培养上清中I卜12水平明显增加（pJ．05）；而几亿、几叶0的浓度无变化U叩．05）。经 N卜y预处理的黑素细胞经沈MOL 配基化后，青显著上调CDS 0、ICAM－1（P＜0．01）和HLA刁R （pJ．05），且这种作用能被特异性的CD40L的单克隆抗体所阻断。因此，IFN－Y体卜能够诱导黑素细胞功能性地表达CD40分子及增加对淋巴细胞的刺激能力，这对于全面认识黑素细胞在细胞免疫应答中的作用具有重要的意义，CD叩分子上调后，黑素细胞可能不经过 CD4咋胞而直接刺激活化0＋的杀伤性 T细胞（CTL）。业已证实，芦答粗提物及芦答素单体对蘑菇酪氨酸酶活性可有明显的抑制作用“’‘’，为了进一步在细胞及分子水平研究其美白机制，我们在以往的研究基础上，观察了芦答素对啪1 an叫鼠黑素细胞株的黑素生成及其相关基困—一酪氨酸酶相关蛋白 TRP＜，TRP刁的。RNA表达水平的影响，该研究对芦菩素的实际应用开发具有理论意义。实脸＝旨在研究芦葵素对Me an叫鼠黑素细胞株黑素生成及其相关基因表达的影响。方法为分别测定不同浓度的芦菩素作用后的Me anA鼠黑素细胞株细胞增殖率、酪氨酸酶含量及黑素量变化，逆转录盯R（RT－PCR）测定酪氨酸酶相关蛋白uP－1和兆卜2 的表达，并与相应浓度的氢眼比较。结果如下0．01 mm引儿J。引儿的芦菩素对黑素细胞的增殖率无影响，芦菩素可显著抑制 Me an叫的酪氨酸酶活性和黑素量，抑制作用随芦菩 5 南京医科大学博士学位论文素的浓度升高而增加，0．linml／L芦菩素处理的Me fan叫的酪氨酸酶抑制率及黑素量与 0．lp mo ／L 的氢酉昆相当（P＞0．0 5）二芦菩素还能显著下调叩P一1和叩P一2 mRNA的表达水平（P＜0．01），但叩P叶和叩P刁的变化和酪氨酸酶及黑素量的变化不平行， O．01 mmol几芦菩素和0．01 pmol儿氢醒作用才当。结论：芦菩素显著抑制Me an－a 的酪氨酸酶活性、黑素量和叩P－UTRP－2 mRNA 的表达水平，直接测定黑素细胞酪氨酸酶浓度和黑素量比检测叩P－UTRP－2 mRNA更能确切地反映芦菩素对黑素i田胞的影，向。
【图文】：

黑素细胞

11111PMTZLOGPMTZLOG图1.未经IFN一Y刺激的黑素细胞表面CD40分.加入不同的浓度IFN一v，分别刺激24h，48h，72h结果如图2。由该图可知，黑素细胞经诱导能显表达(p<0.01):300IU/mlIFN一v刺激72h后CD，加入rhTNF一a或rhEPO的对照组CD40表达量与明显差别(P>0.05)。:N一r;N一r

芦荟素,黑素细胞

A49O图1芦荟素、氢醒对Melan一a鼠黑素细胞增殖的影响荟素对酪氨酸酶活性的影响:不同浓度的a72h后，测定各组细胞酪氨酸酶活性，结知:各浓度的芦荟素可显著抑制Me1an一a制作用随芦荟素的浓度升高而增加(Y=52.6，p<0.01)0.lmmol/L的芦荟素对酪氨酸ol/L的氢酸相当(p>0.05);而lmm。l/L及素对酪氨酸酶的抑制作用分别不及1林m。1/氢醒(P<0.01)。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R751

【参考文献】