临床分离耐喹诺酮类解脲支原体gyrA和parC基因突变的检测

发布时间：2020-05-06 12:44

【摘要】： 目的研究临床分离的耐喹诺酮类解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu) gyrA基因和parC基因突变情况。 方法应用支原体液体培养及固体培养,通过药敏试剂盒检测筛选出对喹诺酮类药物(包括环丙沙星、氧氟沙星、司帕沙星)耐药的Uu 15株,提取其DNA,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区(Quinolone-Resistant Determining Region,QRDR),并将扩增的目的基因片段进行纯化测序,测序后采用Blast比对法分析临床耐药株与解脲支原体血清3型标准菌株(ATCC700970)的序列差异。 结果5株单纯环丙沙星耐药的Uu有3株仅出现了parC的点突变,即248位C突变为T,致83位丝氨酸变为亮氨酸;另2株未发现突变。而10株表现为两种或三种喹诺酮类药物交叉耐药的Uu的gyrA和parC两个基因片段均出现了点突变,其中9株的parC突变位置同上,另有一株第298位C突变为T,未发生氨基酸的改变;gyrA为第336位C突变为A,致112位天冬氨酸被谷氨酸取代。 结论分离到的15株Uu有13株存在QRDR的突变,可能是导致Uu对喹诺酮类耐药的重要因素;且gyrA和parC两个基因同时存在突变可能与多种喹诺酮类药物交叉耐药相关;此外,临床分离Uu对喹诺酮类药物耐药可能还存在其他耐药机制。
【图文】：

图1 gyrA和parC基因PCR产物电泳图（ 此 为 部 分 耐 药 Uu 的 电 泳 图 ， M 为 marker ； 2 ， 4 ， 6 ， 8 ， 10 分 别 为Uu2,Uu3,Uu7,Uu11,Uu13的gyrA基因扩增产物； 1，3，，5，7，9分别为Uu2,Uu3,Uu7,Uu11,Uu13的parC基因扩增产物）2．测序结果2.1 gyrA 测序结果：与网上 Genbank 中发布的解脲支原体标准菌株 ATCC700970(GENEBANK/AF222894)进行同源性比较，15 株临床分离的喹诺酮类抗生素耐药株中，10 株均有同一位点的突变，为 gyrA 基因第 336 位 C 突变为 A，致 112 位天冬氨酸被谷氨酸取代。见图 2A，BLAST 比对结果见图 2B。2.2 parC 测序结果：与网上Genebank中发布的解脲支原体标准菌株ATCC700970 par（CGENEBANK/

AF222894）进行同源性比较，15 株临床分离喹诺酮类抗生素耐药菌株中，有 13株出现点突变，其中 12 株为 parC 的 248 位 C 突变为 T,致 83 位丝氨酸变为亮氨酸；另有一株第 298 位 C 变为 T，因碱基简并未发生氨基酸的改变。见图 3A～4A。BLAST 比对结果见图 3B～4B。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R759;R450

【参考文献】

相关期刊论文 前7条

1 贾蓓,钱元恕;细菌主动外排系统研究进展[J];国外医药(抗生素分册);1999年03期

2 许阳,骆丹,孙蔚斌,缪旭,陈希平;解脲脲原体临床分离株中喹诺酮类耐药株的筛选及其耐药基因的研究[J];临床皮肤科杂志;2005年01期

3 杨怡;李晖;张小伟;;男性泌尿生殖道支原体感染与耐药性变迁[J];实用医学杂志;2006年01期

4 邓伟平,王蕾,李敏;STD门诊患者支原体感染情况调查及药敏结果分析[J];中国皮肤性病学杂志;2002年03期

5 罗迪青;周晓琳;何定阳;黄应表;吴良才;;2001年~2004年我国解脲脲原体分离和耐药情况分析[J];中国皮肤性病学杂志;2006年04期

6 吴利先;王国富;陶娅玲;蔡涛;;解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究[J];中国皮肤性病学杂志;2007年08期

7 陈肖燕,张钧,谢鑫友,董娟,陈光;80株解脲脲原体的药敏及耐药机制分析[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年05期

本文编号：2651277