痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症两家系基因突变分析

发布时间：2020-05-08 08:58

【摘要】： 研究背景营养不良型大疱性表皮松解症(dystrophic epidermolysis bullosa,DEB)是一组单基因遗传性疾病,表现为皮肤黏膜脆性增加,容易出现水疱、大疱,愈后留有萎缩性瘢痕,并伴有甲的改变。根据遗传方式的不同,可将DEB分为常染色体显性遗传(DDEB)和常染色体隐性遗传(RDEB),两型均由编码Ⅶ型胶原的COL7A1基因发生突变所致,Ⅶ型胶原在表皮和真皮间的粘附过程中起重要作用。迄今共发现COL7A1基因突变320余个。痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症(dystrophic epidermolysis bullosa pruriginosa,DEB-Pr)是营养不良型大疱性表皮松解症的一种少见类型,表现为出生时或出生后皮肤黏膜出现水疱、糜烂,瘙痒剧烈,成年后主要表现为大量的抓痕、痒疹样丘疹、结节等。DEB-Pr由COL7A1基因突变所致,目前报道本型COL7A1基因突变位点近30个,其中大部分为甘氨酸替代突变。目的对痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症两家系进行COL7A1基因突变分析,回顾国内报道的DEB家系的临床特点和所有病例的相关突变筛查,以期获得更多的基因型和表型的相关信息。方法提取2个痒疹样DEB家系中的患者及其家庭成员和100名正常对照的外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增COL7A1基因的118个外显子及侧翼序列,用直接测序的方法对所有病例进行COL7A1基因突变检测。对1995年以来国内报道的DEB家系和所有病例的相关突变筛查进行检索,对其临床及突变特点进行分析总结。结果通过对痒疹样DEB两家系进行突变检测,检测到一个国外曾报道过的突变c. 6859G A (p. G2287R)和一个国内外首次报道的突变c. 6860G A (p. G2287E)。而这两个家系的18例健康者及无亲缘关系的100例正常对照均未发现同样的突变位点。总结了自1995年以来中国报道的20个DEB家系,发现本病发病年龄多在出生时～5岁间,皮损好发于胫前、前臂、背部。不同家系甚至同一家系中不同患者的临床表现有差异。甘氨酸替代突变是大多数DEB的致病突变。结论本研究证实甘氨酸替代突变p. G2287R和p. G2287E是引起痒疹样DEB两家系临床症状的特征性突变,而不是正常多态性。营养不良型大疱性表皮松解症具有多种临床类型,不同类型临床表现严重程度不一,突变类型亦因表型而异。本研究进一步探讨了DEB和COL7A1基因突变之间的关系,有助于今后开展基因治疗和遗传咨询。
【图文】：

界面图,界面,基因组序列,编码序列

DNA 原液浓度配成浓度为 100ng/μl 的模板 DNA。.5.4 COL7A1 基因引物合成、稀释和保存.5.4.1 基因的序列获取在NCBI的网页（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）输入COL7A1基因的名称，可该基因的mRNA序列。.5.4.2 基因的Human BLAT Search在UCSC 的数据库（www.genome.ucsc.edu）中，将基因的mRNA的编码序列行human BLAT 搜寻，从而得到COL7A1基因的基因组序列（图1）。

序列,页面,软件,引物

始及中止位置限定设计条件，从输出结果中挑选合适的引物。考虑到测序结准确性和测序仪机器的误差，以及外显子/内含子交界 50 个碱基以内序列可响 mRNA 剪切，一般要超出目标序列边界 50～100bp 左右。引物设计主要是针对基因的编码区进行的，引物设计参照以下原则：1) 引物的长度控制在16～24 bp。2) GC含量控制在40%～60%之间。3) 引物自身不能有连续4个碱基的互补，引物间不能有连续4个碱基的互补4) 引物二聚体及发夹结构的能值不能过高（通常不超过4.5kcal/mol），，二聚及发夹结构的能值过高易导致产生引物二聚体带，并且将降低引物有效度而使PCR反应不能正常进行。5) 对于某些相邻的片段较短的外显子且两外显子间的内含子亦较短的片段可合并设计成一对引物（如外显子3、4设计成一对引物等）。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R758.5

【相似文献】