Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的影响及其治疗银屑病机制的初步研究

发布时间：2020-05-08 14:02

【摘要】： 银屑病是皮肤科一种常见的、具有遗传倾向的慢性炎症性疾病。在外来抗原刺激下,人类白细胞分化抗原4+(Clusters of differentiation,CD4+)T细胞激活,分泌白介素(Interleukin,IL)-2、6、8,刺激角质形成细胞(Keratinocyte,KC)增殖,被激活的KC可分泌IL-1、6、8,再作用于CD4+T细胞;或通过IL-6、8作用于自身,另外,活化的CD4+T细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumor necros factor- alpha,TNF-α)、干扰素γ(gamma Interferon,IFN-γ)使KC分泌细胞间黏附分子(Intercellular adhesion molecule,ICAM)-1,介导KC与CD4+T细胞黏附,使病变周而复始。 Hedgehog(Hh)信号通路是一个调控胚胎发育的信号转导途径,胚胎发育完成后仍可继续调控细胞的生长、增殖和分化。Hh信号通路的激活可以使KC表现出一些银屑病的病理特点,如使KC增殖、角化异常、角蛋白(Keratin,K)14表达水平增高、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)磷酸化增加等。该信号通路的高效、特异性抑制剂cyclopamine,可以迅速清除银屑病皮损,在银屑病的治疗中有显著的疗效。我们曾发现Hh信号通路在银屑病皮损中处于过度激活状态。为进一步确定cyclopamine治疗银屑病的机理,本实验以银屑病SCID小鼠模型、正常人角质形成细胞系(Hacat)为研究对象,观察cyclopamine作用后Hacat细胞因子分泌表达的变化及移植皮片组织病理的变化。本研究的主要实验方法及结果如下: 一.银屑病SCID小鼠动物模型的构建切取银屑病患者皮损移植给SCID小鼠,移植后10天,移植皮片周围分点皮下注射经刀豆蛋白A(ConcanavalinA,ConA)刺激的银屑病患者外周血单一核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMCs),细胞数约为4×106/鼠。移植后15天,绝大多数移植皮片外观和组织病理学特征呈明显的银屑病改变。我们根据Baker评分法,对所有的移植模型进行评分,结果为8.278±0.244(典型的银屑病皮损评分在4.0-10.0之间)。因此从大体表现、组织病理方面,移植皮片均能保留银屑病的表型特点,表明银屑病SCID小鼠动物模型构建成功。二.Cyclopamine对银屑病SCID小鼠模型的作用 1.分组及给药将构建好的动物模型随机分为3组,每组4只,分别对应以下处理:5mmol/mL cyclopamine治疗组:cyclopamine加DMSO、生理盐水稀释,DMSO终浓度40%,均匀涂抹于移植皮片,每次给药50μL,每天给药两次,连续给药15天;5mmol/mL tomatidine对照组:以tomatidine取代cyclopamine,剂量、配制及外用方法同cyclopamine组;空白对照组:DMSO、生理盐水不加cyclopamine,用法同上。 2.结果治疗后15天比较各组治疗效果: 移植皮片外观显示cyclopamine组治疗后移植皮片红斑、鳞屑消失,几乎接近于正常皮肤,组织病理学显示表皮显著变薄、炎细胞浸润减轻、组织学评分显著降低;tomatidine对照组和空白对照组皮损保持明显红斑,可见白色鳞屑,同治疗前相比无明显改变,组织学显示表皮厚度几乎保持不变,尽管角化不全消失,部分颗粒层出现,但仍见角化过度、棘层肥厚、表皮突延长、真皮浅层毛细血管扩张充血及炎细胞浸润等银屑病改变。本部分研究外用cyclopamine进行治疗,发现其可明显促进SCID小鼠银屑病样皮损的恢复,具有良好的治疗效果,为cyclopamine的银屑病治疗向临床应用奠定了基础,为银屑病的治疗提供新的方向。三.Cyclopamine处理后Hacat细胞因子分泌表达的变化本部分实验采用ELISA和RT-PCR方法检测Hacat在cyclopamine处理后IL-6、8、TNF-α分泌表达的变化。结果显示: 1.Hacat在cyclopamine处理12h、24h、48h后用ELISA检测细胞培养上清中IL-6、8、TNF-α的分泌明显低于空白组,差异有统计学意义,尤以5μmol/mL cyclopamine组为著。 2.Hacat在cyclopamine处理12h、24h、48h后用RT-PCR方法检测细胞中IL-8的mRNA表达明显下降,尤以5μmol/mL cyclopamine组为著。Cyclopamine可明显降低Hacat IL-6、8、TNF-α的分泌表达,提示cyclopamine治疗银屑病的机理可能为cyclopamine能降低Hacat分泌IL-6、8、TNF-α这些在银屑病的发病过程中起重要作用的细胞因子。
【图文】：

信号转导,信号传递,失活,复合物

第四军医大学硕士学位论文SuFu、PKA、CKl、GSK3、DYRKI 和 F-BOX[64]。Gli 是一双功能转录调节因子，Hh 缺如时，Gli 蛋白被加工成缺乏 c 一端序列的抑制形式，抑制 Ptc、wg 和 Dpp 基因转录。一旦 Hh 结合 Ptc，全长修饰为激活形式，上调上述三种靶基因的转导。在哺乳动物，Gli 转录因子可调节 Hh 信号的级联放大。因此，Gli 蛋白活性决定着 Hh 目的基因的转录状态[83- 86]。目前发现的参与 Hh 信号转导的胞浆蛋白包括转录因子 Ci/Gli、Fu、SuFu、Cos2、PKA 等。Fu、Cos2 等可促进信号转导，SuFu、Rb23、PKA等则抑制信号转导[87]。

小鼠,组织病理学观察

SCID小鼠银屑病模型
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R758.63

【参考文献】