Survivin特异性淋巴细胞联合CCL17和GM-CSF抗黑色素瘤作用的研究

发布时间：2020-05-17 05:05

【摘要】：恶性黑色素瘤是最致命的皮肤癌,临床上对黑色素瘤的治疗效果差强人意。被用于治疗黑色素瘤的方法有很多,肿瘤免疫疗法作为新一代疗法一直备受关注。而其中,针对肿瘤抗原的特异性免疫疗法已经被证明可以在治疗黑色素瘤上有较好疗效。Survivin抗原是肿瘤相关抗原,是很有潜力的治疗靶标,诱导其特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)可能对黑色素瘤起到一定的治疗效应。此外,GM-CSF和CCL17这两种细胞因子可能对CTL功能的发挥起到重要的作用。因此,本论文研究Survivin特异性CTL联合GM-CSF和CCL17的抗肿瘤作用,旨在为临床上黑色素瘤的免疫治疗提供一定的参考和帮助。第一部分Survivin抗原表位的生物信息学分析及体外细胞学实验目的:通过三个网站运用生物信息技术分析鼠Survivin基因,随后培养Survivin特异性淋巴细胞。方法:利用三个在线网站BIMAS(https://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/)、SYFPEITHI(http://www.syfpeithi.de/bin/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm)和IEDB 3.0(http://www.iedb.org/)对鼠Survivin(Birc5)基因及编码氨基酸全序列的9氨基酸表位肽进行评分、预测,选择评分较高的肽进行合成,制成肽疫苗免疫正常小鼠,然后分离其脾脏淋巴细胞,诱导Survivin特异性CTL作用于小鼠黑色素瘤细胞B16F10,并在培养体系中加入GM-CSF和CCL17蛋白。通过Calcein-AM法和流式细胞术检测三者联合对B16F10细胞的作用。结果:筛选出Survivin_(66-74)(GWEPDDNPI)和Survivin_(85-93)(AFLTVKKQM)两个9肽,并成功诱导出了Survivin特异性CTL。而且,加入CCL17蛋白提高了CTL对B16F10的特异性裂解率,而加入GM-CSF蛋白则没有显著提高。结论:体外联合Survivin特异性CTL和CCL17对B16F10细胞有更强的杀伤作用,而联合GM-CSF并没有增强CTL对B16F10细胞的杀伤作用。第二部分构建稳定表达CCL17和GM-CSF的B16F10细胞系目的:构建稳定表达CCL17和GM-CSF的B16F10细胞系,为后续实验做准备。方法:设计GM-CSF和CCL17的引物,然后再通过一系列基因工程学的方法,将GM-CSF和CCL17基因导入到B16F10细胞中,并使其表达出来。结果:通过酶切、测序等等鉴定方法,我们证明了GM-CSF和CCL17被成功导入到表达载体中,并成功在B16F10细胞中表达。结论:成功构建表达CCL17和GM-CSF的B16F10细胞系,为后续实验奠定基础。第三部分Survivin特异性CTL联合CCL17和GM-CSF对小鼠黑色素瘤的影响目的:探讨过继性输注Survivin特异性CTL联合CCL17和GM-CSF对小鼠黑色素瘤的影响。方法:以小鼠黑色素瘤为模型,观察三者联合对肿瘤体积大小、肿瘤重量的影响,通过免疫染色和免疫组化等方法检测肿瘤局部淋巴细胞的浸润情况。结果:Survivin特异性CTL联合CCL17和GM-CSF可以更好抑制肿瘤生长效果;HE染色和免疫组化显示其肿瘤局部坏死的细胞最多,浸润淋巴细胞也较多。结论:体内实验证明Survivin特异性CTL联合GM-CSF和CCL17可以抑制小鼠黑色素瘤的生长。
【图文】：

-200 雪花制冰机 圣海雪花制冰机厂20 台式低速自动平衡离心机 湖南湘仪实验室仪器开发有限RTEX-5 漩涡混合器 海门市其林贝尔仪器制造有限7520 高速冷冻离心机 美国 Thermo 公司天平 德国 Sartorius 公司器(P20, P100, P1000) 德国吉尔森长酶标仪 美国 Thermo 公司法.1 鼠 Survivin 肽抗原表位的生物信息学分析.1.1 利用 BIMAS 对鼠 Survivin 进行分析站输入 https://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/，可以看到：

广东药科大学硕士研究生毕业论文我们的目的是预测鼠 Survivin 抗原的 H2-Kd 限制性 CTL 表位，因此在中， 项目选择 Kd，并且由于 9 肽常被用于此类实验，，所以在 选择 9；在结果显示 20 个，所以在中点击 20。随后，把 Survivin（Birc5）的氨基酸全序列粘贴复制进入框中，点击运行。2.2.1.2 利用 SYFPEITHI 对鼠 Survivin 进行分析在网页中输入 http://www.syfpeithi.de/bin/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm，可以看到：
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 战雪林;张瑜娟;闵卫平;;黑色素瘤治疗新进展[J];南昌大学学报(医学版);2018年05期

2 ;白酒增加黑色素瘤的风险[J];基础医学与临床;2018年04期

3 郭冰玉;回蔷;常鹏;陶凯;;黑色素瘤靶向治疗的现状与展望[J];中国美容整形外科杂志;2018年04期

4 李旋;;白葡萄酒会增加黑色素瘤发病率吗?[J];中外葡萄与葡萄酒;2017年01期

5 王尧;文习之;丁娅;李丹丹;彭瑞清;李婧婧;张晓实;;可切除的肢端黑色素瘤预后影响因素分析及预测模型建立[J];中山大学学报(医学科学版);2017年02期

6 许小燕;胡俊峰;汪秀玲;徐凯;;黑色素瘤的影像学表现[J];医学影像学杂志;2016年06期

7 蔡新玲;孙晋民;蔡冬梅;孙颖;;黑色素瘤干细胞研究进展[J];解剖科学进展;2016年05期

8 韩彤;;黑色素瘤[J];中国现代神经疾病杂志;2015年02期

9 吴云腾;任国欣;孙沫逸;孔蕴毅;王德辉;步荣发;冉炜;唐瞻贵;陈宏;林明;王丽珍;郭伟;;中国头颈黏膜黑色素瘤临床诊治专家共识[J];中国口腔颌面外科杂志;2015年03期

10 曹冬生;;天堂也有您的茶香——送少君先生[J];普洱;2016年12期

相关会议论文 前10条

1 秦毓敏;钟友刚;;犬黑色素瘤研究进展[A];第六届西部宠物医师大会论文集[C];2017年

2 谭建湘;周建;;与黑色素瘤相关的miRNA研究[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年

3 钟传华;杨文治;王晓兰;;黑色素瘤与痔诊治失误的启迪[A];2012医学前沿——中华中医药学会肛肠分会第十四次全国肛肠学术交流大会论文精选[C];2012年

4 郭军;;黑色素瘤最新进展和未来趋势[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

5 安菊生;吴令英;李宁;俞高志;刘丽影;;原发女性生殖道黑色素瘤42例临床分析[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年

6 陈陆霞;孙保存;张诗武;贺忠江;;眼内移植性黑色素瘤微循环模式的初步研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

7 杨志涛;陆洪光;;死亡受体和黑色素瘤的抗凋亡作用[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

8 寿爽;徐胜;李早荣;;以全身多处骨骼疼痛、骨髓涂片检查提示发现的黑色素瘤一例并文献复习[A];2015浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2015年

9 王雪;黄文华;张晶;余竞光;郭宝林;;国内抗黑色素瘤天然药物的研究进展[A];海峡两岸暨CSNR全国第十届中药及天然药物资源学术研讨会论文集[C];2012年

10 李满芳;胡伟伟;;鼻腔恶性黑色素瘤术后复发1例报道[A];2014年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会论文汇编[C];2014年

相关重要报纸文章 前10条

1 北京积水潭医院骨肿瘤科 刘巍峰 牛晓辉;黑色素瘤治疗呼唤多科协作[N];健康报;2018年

2 记者 房琳琳;新评估方法专“盯”黑色素瘤[N];科技日报;2016年

3 魏文;我国黑色素治疗迈入靶向时代[N];工人日报;2017年

4 记者 杨六香;我国上市首个治疗晚期黑色素瘤靶向药[N];中国医药报;2017年

5 记者 刘宇 郭秀娟;黑色素瘤靶向新药国内上市[N];北京商报;2017年

6 本报记者 裘炯华;中国黑色素瘤治疗迈入靶向时代[N];医药经济报;2017年

7 本报特约撰稿 雷诺岛;热热热!7大抗黑色素瘤新药[N];医药经济报;2016年

8 本报记者 吴若琪;寻求亚洲人黑色素瘤治疗模式尤为重要[N];中国医药报;2016年

9 本报记者 白毅;我国黑色素瘤治疗亟须规范[N];中国医药报;2014年

10 本报记者 白毅;黑色素瘤研究与临床治疗迈入新天地[N];中国医药报;2014年

相关博士学位论文 前10条

1 陈浩;黑色素瘤中新鉴定的与免疫检查点抑制剂疗效相关的生物标志物[D];天津医科大学;2019年

2 杨旭辉;miR-489-3p/SIX1轴在调控黑色素瘤生长和转移中的作用研究[D];中国人民解放军医学院;2019年

3 王晓萌;钙信号传导通路基因多态性与皮肤黑色素瘤特异生存期的关联性研究[D];吉林大学;2019年

4 邹丽丽;基于透皮肽TD增强药物透皮治疗黑色素瘤的实验与理论研究[D];中国科学技术大学;2018年

5 韩鹏勇;黑色素瘤浸润性免疫细胞的调控网络研究[D];内蒙古大学;2018年

6 谷志超;葡萄糖代谢调控在黑色素瘤及尖锐湿疣发病中的作用及机制研究[D];华中科技大学;2018年

7 姬凯元;小鼠黑色素瘤（B16）转录、lncRNA表达分析及B16纳米文库构建[D];山西农业大学;2018年

8 贺牧野;基于光控基因表达技术的纳米递药系统构建及治疗黑色素瘤的研究[D];华东理工大学;2019年

9 刘莲勤;UT-B过表达通过激活p53和线粒体凋亡途径诱导B16黑色素瘤细胞死亡的机制研究[D];吉林大学;2019年

10 景海霞;TRAIL mRNA修饰脂肪干细胞靶向治疗黑色素瘤[D];武汉大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 李佳峰;Sirtuin4和Sirtuin5在黑色素瘤中的表达及其功能研究[D];中国医科大学;2019年

2 陈桂思;Survivin特异性淋巴细胞联合CCL17和GM-CSF抗黑色素瘤作用的研究[D];广东药科大学;2019年

3 陈建;Pimozide联合CpG ODN抗黑色素瘤作用研究[D];新乡医学院;2019年

4 魏甜;减毒沙门氏菌运载PD-1-siRNA增强Pimozide抗黑色素瘤治疗的作用及机制研究[D];新乡医学院;2019年

5 邵薇;氯羟喹通过激活PPARγ抑制恶性黑色素瘤增殖迁移作用研究[D];南京师范大学;2019年

6 杨扶涵;IL-33/ST2影响黑色素瘤迁移侵袭及VM形成的机制研究[D];天津医科大学;2019年

7 孔祥勇;基于深度学习的黑色素瘤分类问题的研究[D];浙江工业大学;2019年

8 吕大进;薏苡果壳黑色素提制鉴定、稳定性及其形成生理机制[D];西南大学;2019年

9 王莹;黄芩素对黑色素瘤的抑癌作用及机制研究[D];延边大学;2019年

10 聂佳慧;红芸豆抗黑色素瘤活性成分及机制研究[D];山西大学;2019年

本文编号：2667986