口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

发布时间：2020-05-22 04:11

【摘要】： 以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新的思路。热休克蛋白Hsp70可以有效将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机体对肿瘤相关性抗原的免疫耐受。本实验将编码热休克蛋白Hsp70和小鼠黑色素瘤特异性抗原酪氨酸酶相关蛋白2基因(Trp2)的重组质粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株。该重组减毒沙门氏菌疫苗以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤细胞特异性毒性T细胞反应,并显著激活了自然杀伤细胞。CTL反应活性达到44.6%(P＜0.01),是PBS对照组(8.4%)的5倍多,自然杀伤细胞占脾脏细胞比例达到4.0%(P＜0.01),是PBS对照组(0.8%)的5倍。在免疫预防实验中,发现减毒沙门氏菌介导的口服DNA疫苗能够明显延缓C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植肿瘤的生长(P＜0.01)。
【图文】：

在氨节青霉素抗性平板上筛选出阳性克隆DHS。 /PcDNA3.1一Hsp70一TrpZ和 DH5a/PeDNA3.1一Hsp7o后，peR鉴定Hsp7o基因(1923bp)和TrpZ基因(792bp)，结果见图4和图5，，从图中可见结果与已知基因大小相符。图4:PeR鉴定Hsp70基因 (1923bP) 1.DNAMarkerDL20002一 3.DH5a/PeDNA3.l一Hsp7o.T甲 2pCR产物4一5.oH5a/pcoNA3.l一 Hsp7opCR产物

1.1pCR扩增Hsp7o基因和肠pZ基因分别以pET-28b一Hsp7o和pSK一TrpZ质粒为模板设计引物，pCR扩增Hsp7o基因和TrpZ基因，PCR结果见图3，从结果可见已经从原先质粒中分别扩增出相应的基因片段。图3:PCR扩增目标基因Hsp70和TrPZ 1.DNAM盯 kerDL20002.Hsp7o基因的pCR产物3.TrpZ基因的PcR产物4.阴性对照 1.2DH5a转化子鉴定在氨节青霉素抗性平板上筛选出阳性克隆DHS。 /PcDNA3.1一Hsp70一TrpZ和 DH5a/PeDNA3.1一Hsp7o后，peR鉴定Hsp7o基因(1923bp)和TrpZ基因(792bp)，结果见图4和图5，从图中可见结果与已知基因大小相符。图4:PeR鉴定Hsp70基因 (1923bP) 1.DNAMarkerDL20002一 3.DH5a/PeDNA3.l一Hsp7o.T甲 2pCR产物4一5.oH5a/pcoNA3.l一 Hsp7opCR产物
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R739.5

【参考文献】

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1 常卫红;重组人热休克蛋白70D的免疫佐剂样效应研究[J];第二军医大学学报;2002年10期

2 李文桂,陈雅棠;细菌重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗研究进展[J];动物医学进展;2004年02期

3 彭健,王R

本文编号：2675419