基因芯片技术检测性传播泌尿生殖道感染常见病原体的研究

发布时间：2020-05-24 19:37

【摘要】：近年来，性传播泌尿生殖道感染(包括淋病和非淋菌性尿道炎)的发病率在我国逐年增加，尤其是非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis，NGU)，由于致病病原体种类多，具有潜伏感染和无症状排菌等生物学特性，给人类公共健康带来严重影响。研究已证实淋病双球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体、单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV-1)、单纯疱疹病毒Ⅱ(HSV-2)、白念珠菌及阴道毛滴虫为引起性传播泌尿生殖道感染(Sexually Transmitted Urogenital Infections，STUI)的最常见病原体。传统的STUI病原学诊断实验室技术条件要求高。因此，建立一种能够针对引起STUI的多种常见病原体同时快速检测的方法，并用于指导临床的诊治很有必要。本研究旨在利用基因芯片技术，结合通用引物PCR(UPPCR)和多重PCR(MPCR)技术，建立同时快速检测多种引起STUI常见病原体的方法。第一章：检测STUI常见病原体三对通用引物的设计、筛选及靶基因的确定。首先将待检测的9种目的病原体分为三类：病毒类(HSV-1、HSV-2)、细菌类(淋病双球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体)及低级真核生物类(白念珠菌、阴道毛滴虫)。在美国生物信息中心(NCBI)的GenBank数据库中获得目的基因(单纯疱疹病毒1、2型的DNA聚合酶基因，，细菌类的16S rRNA基因，低级真核生物类的18S rRNA基因)的核苷酸序列，并进行了BLASTn查询分析。利用专业软件Primer Premier 5.0和Oligo 6.67针对上述各目的基因，设计和筛选了三类通用引物，并了解了这些引物的所有动力学特性(包括引物的长度、位置、PCR产物的长度、位置、Tm值、二级结构、上下游引物的错配、3’端的稳定性及GC含量等)。再用多重PCR技术，针对上述三类通用引物进行设计，选择动力学性质尽可能相近的引物对，并进行不同引物及引物与产物之间的模拟杂交分析，优化引物在同一反应体系时的反应参数。最终筛选出分别针对病毒类、细菌类、低级真核生物类的三对通用引物。获得了不同引物对相应的靶基因在GenBank数据库的位置和序列。第二章：检测STUI常见病原体三对通用引物实验室验证及复合PCR的建立
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R759

【参考文献】