HaCaT细胞与新生隐球菌体外作用前后基因表达谱研究

发布时间：2020-06-10 23:36

【摘要】： 目的: 1.观察新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养2h、4h、12h、24h后光镜下的形态学改变、两者的黏附及融合情况。2.比较实验组(新生隐球菌与HaCaT细胞共培养24h)与对照组(HaCaT细胞单独培养24h)基因表达水平的改变,筛选差异表达基因,了解新生隐球菌与HaCaT细胞体外相互作用的分子机制。方法: 1.原代HaCaT细胞经2-3代传代培养,生长至95%融合贴壁,调整细胞浓度为1×106-7个/ml,再加入密度为lx107-8个/mL的菌悬液或新鲜配置的细胞培养液,混合后于37℃5%CO2培养箱中共培养24h,不同时间点相差显微镜下观察。2.人全基因组表达谱芯片检测实验组与对照组差异表达基因并分析。结果:1.随时间延长HaCaT细胞与新生隐球菌发生黏附及融合,未见明显碎裂破坏等现象。2.实验组与对照组在基因表达水平共有138条基因发生表达上调,其中127条为已知基因,11条为未知基因,涉及细胞黏附与内吞、细胞凋亡、转录调控及信号转导、氨基酸残基磷酸化等多个生物学进程,可能与新生隐球菌侵袭HaCaT细胞的过程有关。讨论:新生隐球菌与HaCaT细胞在体外共培养条件下可以发生黏附内吞,同时HaCaT细胞自身凋亡增加,这可能是由于隐球菌诱导HaCaT细胞相关基因表达上调所致,由此我们认为新生隐球菌感染HaCaT细胞后被其黏附内吞,并造成HaCaT细胞自身死亡是皮肤隐球菌病发生的可能机制。
【图文】：

配好备用的细胞培养瓶吸去培养液，PBS清洗去除脱落细胞，加入5-6mL新鲜配的细胞培养液，再加入1ml密度为lx107-8个／mL的菌悬液，混合后于37℃ 5%CO2培养箱中共培养。（四）观察及记录在光学相差显微镜下分别于共培养 2h、4h、12h、24h 时观察 HaCaT 细胞及新隐球菌的形态学变化、两者的黏附及融合情况。结 果一、共培养 2h 后的形态HaCaT 细胞在培养瓶中大部分呈梭形或椭圆形生长，新生隐球菌菌体呈圆形，，者均匀分布于细胞培养液，未见明显黏附及融合等现象。(见图 1)

第一部分 第二军医大学硕士学位论文二、共培养 4h 后的形态HaCaT 细胞及隐球菌菌体形态基本同前，HaCaT 细胞数目较前稍增加，未见明显细胞与菌体黏附、融合及碎裂等现象。(见图 2)
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R756

【参考文献】

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本文编号：2707034