四硫胸苷对黑色素瘤细胞A375的作用及分子机制研究

发布时间：2020-06-23 03:02

【摘要】：恶性黑色素瘤是一种恶性肿瘤,起源于人类正常皮肤细胞或者原有痣细胞。目前的治疗手段具有靶向性差、对中晚期无能为力等缺点。研究表明,近紫外光辅助抗癌药物治疗方法具有靶向性好、高选择性和低毒性等优点。其中,4-硫胸腺嘧啶脱氧-β-核苷(S4TdR)与UVA协同作用,可以靶向性地杀死数种癌细胞及其组织。本研究将探讨S4TdR/UVA对人恶性黑色素瘤细胞是否具有靶向抑制效应,及其可能的分子机制。采用S4TdR/UVA对人恶性黑色素瘤细胞A375及人正常皮肤永生化角质细胞HaCat分别进行体外(invitro)暴露处理,检测其对细胞增殖和细胞周期的影响。通过对p53通路和chop通路中基因和蛋白表达的定量分析,探讨S4TdR/UVA引起细胞凋亡的分子机制。结果表明,10-6M和10-5M浓度的S4TdR与UVA协同作用能够抑制A375细胞的增殖,但对HaCat细胞的活性无显著性影响。10-5MS4TdR/UVA可导致A375细胞的G1期细胞百分数增加,细胞增殖指数仅为2.86%,细胞增殖受到严重抑制。对相关分子机制的研究发现,S4TdR/UVA可引起A375细胞中p53表达的上调,并激活P53通路,一方面通过上调p21的表达,调控G1/S期的转换,抑制细胞增殖;另一方面,通过上调bax/bcl-2比值,激活Caspase-3表达,促进细胞凋亡。进一步研究表明,S4TdR/UVA可激活A375细胞中的应激感受分子ATF6、IRE1和PERK,并通过上调chop的表达,激活CHOP/GADD153通路,诱发细胞凋亡。本论文的研究结果为近紫外光辅助硫胸苷治疗恶性黑色素瘤提供了基础数据和理论依据。
【学位授予单位】：大连海事大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.5
【图文】：

逑１．２．邋２胸苷激酶介导的靶向性机制逡逑Ｓ４ＴｄＲ可靶向特异进入癌细胞的原理如图１．３所示，在胸苷激酶（ＴＫ）的作逡逑用下，５位０Ｈ？发生磷酸化变成核苷单磷酸，之后在激酶的作用之下聚合形成三逡逑磷酸，核苷三磷酸做为ＤＮＡ合成的基底原料嵌入到癌细胞ＤＮＡ中。由于ＴＫ的逡逑含量与细胞分裂的快慢密切相关，分裂越快速，产生越高的ＴＫ。癌细胞的分裂速逡逑度远远高于正常的细胞［３５］，因此高浓度的ＴＫ可靶向特异性地将Ｓ４ＴｄＲ导入癌细逡逑胞中。Ｓ４ＴｄＲ具有较强的亲脂特性和强紫外长段波长，可以与近紫外的ＵＶＡ协同逡逑作用。与传统光动力治疗方法相比，Ｓ４ＴｄＲ／ＵＶＡ协同作用具有以下三个有点。逡逑（１）毒性低：Ｓ４ＴｄＲ是对近紫外光敏感的化学物质，当它不与近紫外光协同，逡逑而单独作用于细胞时无毒性作用。在构建的动物模型实验中

图１．邋３邋Ｐ５３凋亡信号通路［５５］逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐ５３邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ邋ｐａｔｈｗａｙ．逡逑体通路中的第一条途径Ｃｙｔｃ的释放对于线粒体通路是最为重要的透化反应（ＭＯＭＰ）引发细胞色素Ｃ的解离是凋亡激活的一个重表明Ｃｙｔｃ的释放是依靠Ｂｃｌ－２家族来控制ＭＯＭＰ，邋Ｂｃｌ－２蛋白家族促凋亡蛋白共同组成。通常状态下，抗凋亡相关蛋白抑制促凋亡作用。在细胞受到损伤或者外界的刺激之后，促凋亡蛋白开始发凋亡蛋白有Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ等，抗凋亡蛋白有Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－１邋等［５６丨。逡逑公认Ｂｃｌ－２家族对ＭＯＭＰ的调节有两种主要生物模型［５７］。第一种－２蛋白调控膜上通透性转换通道（Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｔｙ邋Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ邋Ｐｏｒｅ，Ｐ制ＭＯＭＰ，进而调控Ｃｙｔｃ从膜间隙到胞质的释放。Ｂｃｌ－２家族的

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本文编号：2726692