空间环境对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生物学特性的影响

发布时间：2020-07-02 23:51

【摘要】： 研究目的: 1.研究一株野生型B16-F10细胞单克隆化后,获得的亚克隆细胞株的生物学特性(细胞形态、增殖曲线、细胞周期、成瘤性等)与亲代野生型B16-F10细胞相比的异同。 2.与空间诱变的结果做比较,研究空间环境对黑色素瘤B16-F10细胞的生物学特性产生的影响。 研究方法: 将野生型B16-F10细胞用有限稀释法进行单克隆,共获得104株亚克隆细胞株。随机选取十株亚单克隆细胞株作为实验组,编号为2#、3#、9#、32#、45#、50#、69#、74#、83#和99#,对照组为亲代野生型B16-F10细胞。 1.体外实验 利用倒置相差显微镜(Phasecontrast Microscope,PCM)观察对照组和实验组B16-F10细胞形态;通过四甲基偶氮唑盐[3(4,5dimethylthiazol2y1)2,5diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色法检测对照组和实验组B16-F10细胞增殖情况;利用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测对照组和实验组B16-F10细胞周期情况。 2.体内实验 将对照组和实验组B16-F10细胞接种于C57BL/6J小鼠,每株细胞接种20只小鼠,10只为1组,共分2组,其中1组接种于腹腔,观察荷瘤小鼠生存期,另1组接种于小鼠右侧胸胁部皮下,记录肿瘤组织直径生长至3mm时所需时间,记为出瘤时间,待小鼠生长至2周时,处死,分离荷瘤小鼠肿瘤组织、胸腺和脾脏。称重荷瘤小鼠肿瘤组织,观察对照组和实验组B16-F10细胞的成瘤性;称重荷瘤小鼠的胸腺和脾脏,计算胸腺系数和脾系数,观察小鼠免疫系统的变化;利用H.E染色法进行瘤体的病理学检测。 3.分析结果与空间诱变的结果做比较 研究结果: 1.体外实验: 光学倒置显微镜下,对照组和实验组细胞株分布均匀,大多呈现不规则型。与对照组相比,实验组细胞株的形态未见明显差异。MTT检测结果显示,与对照组相比,实验组细胞株的增殖速度呈多向性变异。09#、32#细胞株增殖速率均快于对照组,69#、02#和50#细胞株增殖速率均慢于对照组,其他实验组细胞株的生长趋势与对照组基本一致。FCM检测结果表明:与对照组相比,32#细胞株G0/G1期减少不明显,而09#细胞株G0/G1期细胞明显减少,S期细胞增多,69#、02#和50#细胞株G0/G1期明显增多,G2/M期、S期减少,与各对应细胞增殖速度趋势一致。 2.体内实验 与对照组相比,69#、50#、02#、83#细胞株所致荷瘤小鼠的出瘤时间延长、生存时间延长、肿瘤组织重量明显减少、脾系数明显增加;09#、32#细胞株所致荷瘤小鼠的肿瘤组织重量明显增加、生存时间明显缩短、胸腺系数和脾系数减小,其它实验组细胞株所致荷瘤小鼠未见明显差异。肿瘤组织切片H.E染色结果显示:对照组和32#细胞株所致荷瘤小鼠的肿瘤组织坏死组织较多,69#和50#肿瘤组织内坏死组织较少。 3.筛选出一株细胞增殖速度明显减慢,出瘤时间延长,瘤体重量减小,生存时间延长,编号为69#。此株成瘤性减弱的细胞与空间诱变获得的免疫原性增强的细胞株做比较,研究空间环境对黑色素瘤细胞的影响。 4.与对照组69#细胞相比,空间组11#细胞形态有较大改变,细胞体积增大,突起增加。MTT检测结果显示,空间组11#细胞增殖速度明显减慢。体内实验结果显示,空间组11#细胞荷瘤小鼠的瘤体重量明显减小、生存期延长。肿瘤组织切片H.E染色结果显示,空间组11#细胞肿瘤组织内可见淋巴细胞浸润。 结论: 1.野生型B16-F10细胞单克隆化后,其亚克隆细胞株的生物学性状(细胞形态、增殖曲线、细胞周期、成瘤性等)与亲代B16-F10细胞相比呈现多向性变异。 2.与对照组69#细胞相比,空间环境对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的生物学特性能够产生较强的诱变作用。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R739.5
【图文】：

图1对照组和实验组 a:对照组(野生型B16一F10)b:实验组02f:实验组45#9:实验组50#h:实验组99#3.对照组和实验组细胞株的增殖曲线MTT检测结果显示，与对照组相比，实随机抽取的10株亚克隆细胞中有5株细32#细胞株增殖速率均快于对照组，69#、他亚克隆细胞株的生长趋势与对照组基本1。8 1.6 1.4 1.2 861100树丫巴 0.40。2

99#3.对照组和实验组细胞株的增殖曲线MTT检测结果显示，与对照组相比，实验组细胞株的增殖速度呈多向性变异(图2)。随机抽取的10株亚克隆细胞中有5株细胞生长速度与对照组比较有明显差异，09#、32#细胞株增殖速率均快于对照组，69#、02#和50#细胞株增殖速率均慢于对照组，其他亚克隆细胞株的生长趋势与对照组基本一致。1。8 1.6 1.4 1.2，69#-刁卜-B1602#99#74#3#—32#—09#83#50#一一45# 861100树丫巴 0.40。2时间(d)图2:对照组和实验组细胞株的增殖曲线4.对照组和实验组细胞株的周期分布FCM检测 B16一F10细胞DNA含量，判断其细胞周期分布，结果表明:与对照组相比，32#细胞株GO/Gl期减少不明显，而09#细胞株Go/Gl期细胞明显减少

【参考文献】

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本文编号：2738852