microRNA-203a-5P对IL-6、TNF-α及IL-1β在AD中的调控作用研究

发布时间：2020-07-05 03:03

【摘要】：目的:通过细胞实验过表达或者抑制MicroRNA-203a-5p的表达,分析它对HaCaT细胞中IL-6、TNF-α及IL-1β等细胞因子的影响,鉴定miR-203a-5p对三者是否存在靶向调控作用。再结合特应性皮炎患者皮屑中miR-203a-5p、IL-6、TNF-α及IL-1β的表达情况进一步验证它们之间的相互关系,并分析其在特应性皮炎发病机制中的作用,为以miR-203a-5p及其下游靶基因为主的靶向治疗提供一定的理论依据,为特应性皮炎的治疗研究提供新思路。方法:1.通过体外培养HaCaT细胞系,分为4组进行转染:miR-203a-5p模拟物组(mimics组)、模拟物阴性对照组(mimics NC组)、miR-203a-5p抑制物组(inhibitor组)、抑制物阴性对照组(inhibitor NC组)。转染后采用qPCR方法进一步检测miR-203a-5p及各组IL-6、TNF-α及I L-1β的表达水平。2.临床收集特应性皮炎患者及正常对照组皮屑组织,经过速冻后液氮研磨,Trizol法提取两组皮屑的总RNA,用qPCR方法检测两组皮屑中miR-203a-5p、IL-6、TNF-α及IL-1β的表达水平。结果:1.细胞实验情况将miR-203a-5p模拟物组、抑制物组及两组阴性对照组等4组样品共转染HaCat细胞。结果显示:转染miR-203a-5p mimics后,与其阴性对照组相比,miR-203a-5p的表达水平明显增高(P0.01),证明转染成功。HaCat细胞中TNF-α及IL-6的mRNA表达水平与对照组相比明显降低(P0.01),IL-1βmRNA表达水平增高(P0.05)。转染miR-203a-5p inhibitor后,HaCat细胞中TNF-αmRNA表达水平增高,I L-6及IL-1β的mRNA表达水平降低(P0.05)。2.临床标本检测情况qPCR检测结果表明,特应性皮炎患者的皮屑中mi R-203a-5p、IL-6、TNF-α的mRNA表达量高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.01),IL-1β表达量略高于正常对照组水平,差异不具统计学意义(P0.05);再进行Spearman相关性分析时发现miR-203a-5p与TNF-α、IL-6、IL-1β的表达量无相关性(r分别0.26、0.15、0.18,P0.05)结论:(1)AD患者皮屑中miR-203a-5p、TNF-α、IL-6及IL-1β的mRNA表达增加,提示miR-203a-5p、TNF-α、IL-6及IL-1β共同参与了AD的发生及发展。(2)在HaCat细胞中miR-203a-5p可以抑制TNF-α、IL-6的表达,促进IL-1β的表达。但在对AD患者皮屑的研究中,TNF-α、IL-6、IL-1β异常表达增高,未发现miR-203a-5P对TNF-α、IL-6、IL-1β有效的直接的调控作用,其他的调控方式尚未可知。推测其原因可能是由于特应性皮炎时表皮屏障功能障碍或者表皮重塑,在炎症反应阶段,miR-203a-5P的调控作用被改变或抑制。(3)本研究暂通过在细胞实验水平上验证了miR-203a-5P对TNF-α、IL-6、IL-1β的靶向调控作用,同时结合AD皮屑组织及正常皮肤组织中四者的表达情况,初步探讨了miR-203a-5P在AD的发生及发展中可能存在的发病机制及调控通路,在基因水平研究了miR-203a-5P对TNF-α、IL-6、IL-1β的调控作用,从miRNA-通路-炎症因子-疾病的相关角度揭示AD可能的发病机制,但尚未对特异性miRNAs与其相关易感基因调控功能、细胞因子等方面进行深入的研究,下一步我们将进一步从蛋白水平研究他们的表达及其相互间的作用,对miR-203a-5P在AD发病中的分子机制作用及涉及的细胞通路进行更为深入的研究,探讨miR-203a-5P作为AD的诊断、治疗和预后分析的靶点及整个网络调控系统在AD的发病、病情演变形成过程中所扮演的角色,为AD的靶向治疗及今后高效抑制剂的设计提供一定理论依据。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.2
【图文】：

3.2 miR-203a-5p 对 TNF-α、IL-6、及 IL-1βmRNA 的表达以 HaCat 细胞为模型，分别加入 miR-203a-5p mimicsp inhibitor 及其无关序列的阴性对照组，miR-203a-5p 对6、及 IL-1βmRNA 的表达水平的影响见图 7-10。

转染后 miR-203a-5p 的相对表达水平加入 miR-203a-5p mimics 后，与 NC 组相比较，HaCat 03a-5p 的表达水平增高（P<0.01），加入 miR-203a-5p inh与 NC 组相比较，HaCat 细胞中 miR-203a-5p 的表达水平降低

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本文编号：2741989