miR-205-5p在人皮肤鳞癌SCC12细胞中的表达、作用及其机制研究

发布时间：2020-07-08 06:22

【摘要】：目的:本研究拟通过miRNA基因转染技术,研究miR-205-5p对人皮肤鳞癌SCC12细胞增殖能力的影响及其与Bcl-2关联情况。方法:1.应用miRNA基因芯片检测人永生化角质形成细胞HaCaT与人皮肤鳞状细胞癌SCC12细胞中差异表达的miRNA。2.采用RT-PCR法(Real-time PCR,实时荧光定量PCR)检测miR-205-5p在HaCaT与SCC12细胞中的表达。3.利用脂质体Lipofectamine 2000分别将miR-205-5p模拟物(miR-205-5p mimics)、miR-205-5p抑制物(miR-205-5p inhibitor)、miRNA阴性对照(miRNA-NC)转染至SCC12细胞,对照组不做转染。4.用RT-PCR法分别检测转染48小时后四组细胞miR-205-5p的表达情况。5.CCK8法检测转染48小时后四组SCC12细胞的增殖能力。6.流式细胞术检测转染48小时后四组SCC12细胞的凋亡情况。7.RT-PCR检测转染48小时后各组细胞Bcl-2的mRNA含量。8.Western-blotting检测转染72小时后各组细胞中Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。结果:1.RT-PCR检测结果显示miR-205-5p在HaCa T细胞中的表达明显高于SCC12细胞(P0.01),其表达量约为SCC12细胞的20倍。2.转染miR-205-5p mimics后miR-205-5p组的miR-205-5p的表达量明显高于miR-205-5p inhibitors组、NC组和control组(P0.05);miR-205-5p inhibitors组的miR-205-5p的表达量明显低于miR-205-5p组、NC组和control组(P0.05);然而NC组和control组相比则无明显差异(P0.05)。3.CCK8法检测显示,miR-205-5p组细胞的增殖能力明显低于miR-205-5p inhibitors组、NC组和control组(P0.05);miR-205-5p inhibitors组的细胞增殖能力明显高于miR-205-5p组、NC组和control组(P0.05);然而NC组和control组相比则无明显差异(P0.05)。4.流式细胞仪检测细胞凋亡情况显示,miR-205-5p组的细胞凋亡率明显高于miR-205-5p inhibitors组、NC组和control组(P0.05);miR-205-5p inhibitors组的细胞凋亡率明显低于miR-205-5p组、NC组和control组(P0.05);然而NC组和control组相比则无明显差异(P0.05)。5.RT-PCR法检测各组Bcl-2的mRNA表达,统计分析结果miR-205-5p组Bcl-2的mRNA表达量低于miR-205-5p inhibitors组、NC组和control组(P0.05);miR-205-5p inhibitors组Bcl-2的mRNA表达量高于miR-205-5p组、NC组和control组(P0.05);然而NC组和control组相比则无明显差异(P0.05)。6.Western-blotting检测miR-205-5p对Bcl-2蛋白表达的影响,统计分析结果miR-205-5p组Bcl-2的蛋白表达量低于miR-205-5p inhibitors组、NC组和control组(P0.05);miR-205-5p inhibitors组Bcl-2的蛋白表达量高于miR-205-5p组、NC组和control组(P0.05);然而NC组和control组相比则无明显差异(P0.05)。结论:1.miR-205-5p在SCC12细胞中的表达较HaCaT细胞下调。2.miR-205-5p可以抑制靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白的表达。3.miR-205-5p可以显著抑制SCC12细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与miR-205-5p对靶基因Bcl-2的抑制有关。4.miR-205-5p有可能成为皮肤鳞癌诊断、治疗的新靶点。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.5
【图文】：

微阵列,表达水平,细胞

图 1.微阵列分析 miR-205-5p 的表达水平2.miR-205-5p 在 HaCaT 细胞、SCC12 细胞中的表达情况根据 RT-PCR 得到的结果，以HaCaT细胞表达量为1，SCC12细胞中miR表达量为 0.05 ±0.01。如下图所示，SCC12 细胞 miR-205-5p 明显低于

表达水平,转染

图 2.miR-205-5p 在 SCC12、HaCaT 细胞中的相对表达量（**P <0.01）3.分别转染 miR-205-5p mimics、 miR-205-5p inhibitors、 miR-NC 后 SCC12胞中 miR-205-5p 的表达水平根据 RT-PCR 得到的结果，以 control 组表达量为 1，miR-205-5p 组、

转染,试剂,波长,细胞

图 3.转染后 miR-205-5p 表达量的变化（*P <0. 05 ）4、miR-205-5p 对细胞增殖能力的影响SCC12 细胞经转染处理 48 h 后,各组加入 CCK8 试剂，设置波长为 450测各孔的 A 值，A 值越高，则细胞增殖能力越强。miR-205-5p 组、 miR

【参考文献】