昔维考拉地霉感染的临床与试验研究

发布时间：2020-07-11 04:16

【摘要】：目的按照传统的分类方法，地霉主要分为白地霉（Geotrichum candidum）、头地霉（Geotrichum capitatum）、棒地霉（Geotrichum clavatum）。其中白地霉和头地霉最为常见。近10年来有关地霉的报道较少。本科于2002年8月在一例脓癣样地霉病的患者身上分离出一种新型地霉，经中科院微生物研究所鉴定为昔维考拉地霉（Geotrichum silvicola）。本菌在1997年新版的国家菌种目录中尚无收录，是从巴西果蝇身上分离出来的一种地霉，尚未被正式发表过，从人身上分离出本菌是国内、外首次。因此，有关昔维考拉地霉（Geotrichum silvicola）的形态学、营养生理学及其对人类的致病力国内外尚无报道，仅就其基因学方面有初步的研究。本研究从形态学、营养生理学、分子生物学等各个角度对昔维考拉地霉（Geotrichum silvicola）进行初步的研究，并通过动物试验及毛发受侵试验对其致病力进行进一步的探讨。为指导昔维考拉地霉（Geotrichum silvicola）感染的诊断与治疗提供了临床依据，具有重要的理论和现实意义。方法 1真菌培养将菌落接种于改良沙堡弱培养基上，分别放在27℃、37℃温箱中，培养3天，然后观察菌落生长情况。直接镜检：挑取少许菌落放于载玻片上，加10%KOH并放置盖玻片，在低倍、高倍镜下仔细观察菌落形态。扫描 WP=4 电镜观察：将培养3~10天的菌落放于2.5%的戊二醛中固定，扫描电镜观察。 2毛发受侵试验将该菌分别接种于改良沙堡弱固体培养基、液体培养基中，采用3个不同年龄组的健康人的毛发，高压灭菌后置于所种菌上方。每1周观察2次，在光镜、电镜下观察毛发受侵情况。将全部数据进行统计学处理后得出结论。用SAS统计学软件组间比较的t检验及方差分析法。 3动物试验选用豚鼠60只。随机抽取30只豚鼠用环磷酰胺800mg/kg腹腔内注射，地塞米松0.5mg/只肌注,另外30只未经处理。3天后,对两组中的豚鼠的一侧背部分别用擦皮法和皮下注射法接种菌悬液（浓度为2×106CFU），另外一侧接种0.9%的生理盐水做对照组，10天后观察结果。将全部数据进行统计学处理后得出结论。各试验组计量资料用SAS统计学软件组间比较的t检验。 4营养生理学将菌落接种于改良沙氏培养基上，3天后配置菌悬液，利用法国生物梅里埃公司的API20CAUX试剂盒检测,美国德灵公司的Microscan WalkAway-40全自动微生物分析仪分析。 5 DNA序列分析对菌株26SDNAD1/D2区序列分析经正反链验证，确定了534个碱基位点，通过GenBank/EMBL/DDBJ/PDB核酸序列数据库进行同源序列检索。 6温度试验将受试菌株接种在沙堡弱固体培养基上，分别放在27℃、37℃、42℃温箱中，7天后观察生长情况。然后，将27℃温箱中的菌株放在37℃温箱中，将37℃温箱中的菌株放在27℃温箱中， 3天后再观察结果。 WP=5 7体外药敏试验使用天津金章医用新技术研究所提供的酵母样真菌最低抑菌浓度（MIC）药敏试剂盒。将受试菌株在用沙堡弱培养基传代纯培养，制成混悬液。用麦氏0.5号管进行比浊至相同浊度。接种后，放到35℃温箱中，孵育24h、48h观察结果。结果 1形态学真菌培养培养3天后均见同一菌落生长，27℃培养2-3天，长出表面平坦，中间有皱褶的，湿润的乳白色酵母样菌落，有粘性。10天后菌落变成乳黄色，表面长出绒毛。37℃培养始终为乳白色至乳黄色、湿润的酵母样菌落。挑取菌落涂片镜检可见大量矩形、桶型、椭圆型关节孢子，并可见关节孢子的一侧长出芽管。小分生孢子呈圆形，出芽或不出芽，可见厚壁孢子。扫描电镜观察：可见成链的关节孢子，呈矩形、桶型、椭圆型或圆形，关节孢子之间不相连；圆形的芽生孢子及大量菌丝。2 毛发受侵试验：2周后与菌落接触毛发的表面可见乳白色乳酪样物黏附，4周后镜检发现在毛发表面有大量关节孢子及圆形孢子。3个月后光镜下可见毛发表面有些残缺。扫描电镜示毛发被大量孢子及菌丝附着、包绕，可见菌丝穿入毛发，毛小皮有破坏现象，毛发表面凹凸不平。统计学处理后，各组差别有显著性P〈0.05。以改良沙氏固体培养基上比液体培养基感染现象出现早。27℃生长的菌落比37℃对毛发的感染时间早。年龄越小者的毛发越早被感染。3动物试验 10天后观察发现，用皮下注射法接种菌悬液的豚鼠，注射部位均有质地较硬的结节，统计学处理后，两组差别有显著性P〈0.05。其中经免疫抑制的豚鼠的结节大且出现早,未经免疫抑制的豚鼠的 WP=6 结节较小且出现晚,而对照组无结节用擦皮法接种菌悬液的豚鼠，接种处可见潮红、肿胀、渗出、结痂，而对照组无皮损。取结节做病理，苏木精-伊红染色时真皮可见慢性化脓性脓肿，其中可见圆形孢子及关节孢子和菌丝。PAS染色可见菌丝、关节孢子及圆形孢子。取经免疫抑制的豚鼠擦皮法形成的皮损做病理，PAS染色均可见角质层有大小不一的关节孢子及菌丝。取结节中的脓液直接涂片PAS染色可见菌丝及孢子。未经免疫抑制的豚鼠PAS染色均可见角质层有大小不一的关节孢子。而对照组无异常，未见菌体。4营养生理学对照法国生物梅里埃公司的API20CAUX编码册，提示该菌属于地霉菌。其中葡萄糖、甘油、阿拉伯糖、木糖醇均为阳性；2-酮基-葡萄糖酸盐、木糖、阿东糖醇、半乳糖、肌醇、山梨醇、( -
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R756

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