整合素αVβ3，脂筏和c-SRC在人类黑色素瘤A375细胞迁移中的作用研究

发布时间：2017-03-30 01:13

  本文关键词：整合素αVβ3，脂筏和c-SRC在人类黑色素瘤A375细胞迁移中的作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脂筏是细胞膜上的微结构域,它能够起到稳定细胞膜的作用。同时,脂筏能够在细胞膜上形成较大的平台,通过负载受体蛋白起到信号转导的作用。整合素位于细胞膜的表面,作为细胞表面的粘附受体分子起作用。在细胞内部,有很多非受体酪氨酸激酶,例如c-SRC,它能够协助信号从细胞内部转导到膜上的受体蛋白。而且,这些非受体酪氨酸激酶也能够接收从细胞膜上的受体蛋白传递到细胞内部的信号。这种从外部到内部和从内部到外部的信号转导形式调节了多种生理途径,包括细胞迁移、存活、细胞与细胞之间的粘附、细胞增殖、血管的发生和浸润。 肿瘤细胞能够把这些正常的生理过程为己所用,进行延伸和侵袭性生长并转移到远端部位。经过划痕愈合分析,Transwell迁移分析和靶定整合素β3特异性的siRNA实验,我们证实了脂筏、c-SRC和整合素aVβ3在调节A375细胞迁移的过程中起到一定作用。免疫共沉淀和免疫荧光共定位分析揭示了脂筏的扰乱并不影响c-SRC和整合素aVβ3的相互作用。但是,我们注意到,脂筏的扰乱使粘附斑点的数量减少,表明脂筏可能能够影响整合素aVβ3的簇集,从而影响A375细胞的迁移。而且,因为脂筏并不直接影响c-SRC的活性,推测脂筏和c-SRC可能是通过独立调节整合素aVβ3来影响细胞迁移的。揭示能够介导A375细胞迁移的这些因素为解释多种癌症细胞紊乱的原因提供了证据。
【关键词】：整合素αVβ3 脂筏 c-SRC 癌症细胞迁移 焦点粘附 脂筏扰乱
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• CONTENTS6-9
• INTRODUCTION9-32
• 0.1 GLOBAL CANCER STATISTICS14-15
• 0.2 CONTROVERSIES OVER THE EXISTENCE OF LIPID RAFTS15-16
• 0.3 The STRUCTURAL ANALYSIS AND COMPOSITION OF LIPID RAFTS, INTEGRIN αVβ3 AND c-SRC16-22
• 0.3.1 Lipid Rafts16-18
• 0.3.2 Integrins18-20
• 0.3.3 The structural composition and activation of c-SRC20-22
• 0.4THE ROLE OF LIPID RAFTS, c-SRC and INTEGRIN αVβ3 IN REGULATING CANCER CELL MIGRATION22-25
• 0.4.1 Lipid Rafts Regulate Cell Migration Through Enhancing Signal Transduction22-23
• 0.4.2 Integrins'Adhesive Structures Form Linkage Between The ECM And Actin Cytoskeleton To Bring About Migration23-24
• 0.4.3 c-SRC Acts As A Kinase To Regulate Migration24-25
• 0.5 THE CROSSTALK BETWEEN LIPID RAFTS, c-SRC AND INTEGRIN αVβ325-28
• 0.6 MODELS USE IN THE STUDY OF CELL MIGRATION28-29
• 0.7 RESEARCH AIMS29-30
• 0.8 RESEARCH SIGNIFICANCE30-32
• MATERIALS32-35
• 1.1 TUMOR CELL LINE32
• 1.2 COMPETENT CELLS STRAIN32
• 1.3 ANTIBODIES32
• 1.4 REAGENTS32-33
• 1.5 MAIN INSTRUMENTS33
• 1.6 MEDIA AND SOLUTION PREPARATIONS33-35
• 1.6.1 SDS-PAGE, Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis Solution34
• 1.6.2 Western Blot Buffers34-35
• 1.6.3 LB (Luria Bertani) Medium Preparation35
• 1.6.4 Agarose Gel Preparation35
• METHODS35-51
• 2.1 CELL CULTURE35
• 2.2 c-SRC DOMAINS PLASMID CONSTRUCT35-42
• 2.2.1 Extracting the plasmid from the filter paper36
• 2.2.2 Transformation36
• 2.2.3 Culturing and storing single clones36
• 2.2.4 Extraction of plasmid from grown cultured medium36-38
• 2.2.5 Polymerase Chain Reaction(PCR)38-39
• 2.2.6 PCR Master Mix39
• 2.2.7 Primers39-40
• 2.2.8 Running the gel40
• 2.2.9 Purifying the gel40-41
• 2.2.10 Restriction cutting41
• 2.2.11 Ligation41-42
• 2.3 CELLS TRANSFECTION42
• 2.4 siRNA INTEGRIN β3 PREPARATION42-45
• 2.4.1 Making cDNA43-44
• 2.4.2 PCR Master Mix44
• 2.4.3 PCR Cycle Reaction Times44
• 2.4.4 Integrin β3 Primers44
• 2.4.5 Confocal Immunofluorescence Microscopy44-45
• 2.5 MTT CELL PROLIFERATION ASSAY45
• 2.6 WOUND HEALING ASSAY45-46
• 2.6.1 Calculations46
• 2.7 TRANSWELL ASSAY46-47
• 2.8 COIMMUNOPRECIPITATION AND WESTERN BLOT47-48
• 2.8.1 Western Blot47-48
• 2.9 CONFOCAL IMMUNOFLUORESCENCE MICROSCOPY FOR COLOCALIZATION EXPERIMENT48
• 2.10 STATISTICAL ANALYSIS48-51
• RESULTS51-62
• 3.0 LIPID RAFTS AND c-SRC AFFECTS CELL PROLIFERATION51-52
• 3.1 LIPID RAFT DISRUPTION AND c-SRC INHIBITION INDEPENDENTLY REDUCES A375 CELL MIGRATION52-57
• 3.2 OVEREXPRESSION OF c-SRC DOES NOT INCREASE A375 CELLS MIGRATION57-58
• 3.3 DEPLETION OF INTEGRIN β3 CAUSES A DECREASE IN A375 CELL MIGRATION58-60
• 3.4 LIPID RAFT DISRUPTION DOES NOT AFFECT c-SRC INTERACTION WITH INTEGRIN αVβ360-62
• DISCUSSION62-65
• CONCLUSION65-66
• REFERENCES66-73
• ACKNOWLEDGEMENT73-74
• PUBLISHED PAPERS DURING MASTER DEGREE (2010-2013)74

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