羟基酪醇调控自噬缓解毛乳头细胞氧化应激损伤机制研究

发布时间：2020-07-22 02:49

【摘要】：背景和目的脱发是一种多基因疾病,其不仅受机体内部基因调控,同时也受外部环境因素影响。氧化应激在雄激素秃发疾病机制中扮演着重要的作用,尤其是男性模式秃发患者。毛乳头细胞(demal papilla cells,DPCs)具有诱导毛囊形成和调控毛发生长关键作用。氧化应激中将导致毛乳头细胞增殖减少以及毛发生长抑制因子分泌增加。自噬作为真核生物重要的生理过程,能通过降解氧化应激损伤蛋白维持机体内环境稳定。在脱发疾病中,自噬通过阻止毛囊干细胞耗竭被认为重要的毛囊细胞保护机制。轻基酪醇(Hydroxytyrosol,HT)是橄榄油主要的抗氧化成分,可激活自噬缓解氧化应激炎性损伤。临床研究表明,地中海饮食有助于降低雄性激素秃发风险。羟基酪醇作为地中海饮食丰富的来源之一,其是否能保护毛囊细胞促进毛发生长是个值得探讨的环节。因此本实验将观察羟基酪醇对过氧化氢(H_20_2)处理的DPCs作用。该研究结果将为脱发防治提出了新策略,同时也为地中海饮食有益于毛发生长作出新解释。方法1.HT对氧化应激诱导的小鼠来源DPCs生物学研究原代分离培养鼠触须垫毛乳头细胞,取第三代细胞加入不同浓度H_2O_2(50,100,200,400umol/ml)处理后24小时,用CCK-8测量细胞的增殖活性。接下来用100 umol/ml H-2O2处理毛乳头细胞2小时,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS表达量。以上判断H_2O_2处理后氧化应激对DPCs损伤。为进一步观察HT对DPCs保护作用,采用HT 75μM预处理DPCs 30分钟,使用PCR,ELISA,DCFH-DA技术检测HT对H_2O_2处理后的DPCs生物学活性和特性的影响。2.HT对氧化应激诱导的小鼠来源DPCs作用机制研究采用 100umol/ml H_2O_2和 100umol/ml H_2O_2+75umol/ml HT处理DPCs 2小时,用Western Blot和PCR检测细胞自噬相关蛋白LC3和基因Beclin-1。为进一步明确调控自噬对于HT保护DPCs作用机制,使用自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ),再进行相关的生物学活性和特性的检测。结果1.HT对小鼠来源DPCs氧化应激中的生物学研究CCK-8结果显示,与空白对照组相比,H_2O_2对细胞的活性下降呈浓度依赖性。H_20_2处理后ROS水平以及炎性因子(IL-6,TNF-α)明显升高,毛发生长因子(FGF,PDGF,VEGF)分泌降低。由此可见,H_2O_2对DPCs具有细胞毒性。相反,使用HT预处理的DPCs明显改善了 H_2O_2.对细胞的氧化应激损害。2.HT对小鼠来源的DPCs氧化应激中机制研究H_2O_2处理后的DPCs明显降低了细胞LC3和Beclin-1表达,提示H_2O_2抑制自噬的表达。相反HT预处理的DPCs逆转了这一趋势,明显增强了自噬的表达。加入自噬抑制剂氯喹,HT所介导的氧化应激中DPCs保护作用被明显逆转,进一步论证调节自噬是HT保护DPCs免受氧化应激损伤的重要机制。结论HT通过增强自噬保护DPCs,缓解氧化应激诱导的炎性损伤,促进毛发生长因子分泌。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.71
【图文】：

果逡逑．逦Ｈ２0２介导的氧化应激损伤导致ＤＰＣｓ细胞活性降低逡逑将ＤＰＣｓ暴露于不同浓度的Ｈ２０２加药处理２４ｈ，ＣＣＫ－８细胞活性结果显示：逡逑对照组相比，暴露于不同浓度５０，１００，邋２００和４００邋ｕｍｏｌ／ｍｌＨ２０２后ＤＰＣｓ细逡逑活性明显降低，并呈浓度依赖性。由此可见，Ｈ２０２对ＤＰＣｓ具有细胞毒性。逡逑（详见ｆｉｇｕｒｅｌ）为了更好地观察后续实验以及文献查阅，我们选用了浓度适中逡逑００邋ｕｍｏｌ／ｍｌ邋Ｈ２０２进行后续实验。逡逑．逦ＨＴ提高氧化应激状态下ＤＰＣｓ细胞活性逡逑上述结果表明，Ｈ２０２处理后ＤＰＣｓ的ＤＰＣｓ生存活性明显降低。接下来，逡逑用ＨＴ预敷ＤＰＣｓ邋３０ｍｉｎ，然后再加入不同浓度Ｈ２０２，我们可以观察到不同浓逡逑下ＨＴ＋Ｈ２０２组相对于单独Ｈ２０２组生存活性明显升高。据此，我们初步得出逡逑Ｔ可以缓解ＤＰＣｓ氧化应激损伤增强细胞活性。（详见ｆｉｇｕｒｅｌ－１）逡逑２．0ｎ逡逑

图１－３使用ＨＴ邋（７５｜ＩＭ）孵育１小时，加入Ｈ２０２刺激２４小时

图１－４使用ＨＴ邋（７５［ｉＭ）孵育１小时，加入Ｈ２0２刺激２４小时

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本文编号：2765210