REL、TNIP1基因多态性及负性情绪与银屑病相关性研究

发布时间：2020-08-04 13:09

【摘要】：当今社会,人们压力越来越大,焦虑、抑郁、精神紧张等负性情绪逐渐增多。长期的负性情绪可以造成机体内环境稳态紊乱,引发心身疾病,心身疾病持久不愈又可以加重负性情绪,形成恶性循环。银屑病属于典型的心身疾病。银屑病病程长、易复发、难治愈,影响外观,对患者的精神状态影响甚大。银屑病的发病机制不清,遗传、精神神经因素可能在其发病中起到重要作用。遗传学研究已经发现了许多银屑病易感基因,其中REL基因和TNIP1基因可能在银屑病的发病过程和易感性等方面发挥了重要的作用。目的探讨REL、TNIP1基因多态性及负性情绪与银屑病的相关性,为银屑病患者的预防和临床治疗提供重要理论依据和指导。方法在2014年5月至2015年12月间收集419例银屑病患者和416例健康对照。采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、匹兹堡随眠指数(PSQI)量表对受试对象进行负性情绪和睡眠质量的评定;提取受试者全血DNA,用连接酶检测反应方法对REL基因SNP位点rs702873及TNIP1基因SNP位点rs17728338进行基因检测分型。利用epidata软件进行数据录入,所有描述性统计利用SPSS13.0进行统计学分析。对基因分型数据利用软件SPSS 13.0和PLINK1.07进行统计学分析。结果银屑病组伴焦虑和抑郁人数比例分别为44.9%、63%,健康对照组伴焦虑和抑郁人数比例分别为7.5%、11.8%,银屑病组显著高于对照组(P=0.000)。银屑病组SAS评分为41.33±8.00分,SDS评分为45.21±9.06分,健康对照组SAS评分为36.57±7.66分,SDS评分为29.08±10.36分,银屑病组SAS、SDS得分显著高于对照组(P=0.000)。银屑病组和健康对照组存在睡眠障碍人数比例分别为59.2%、32.2%,银屑病组显著高于对照组(P=0.000)。银屑病组PSQI平均得分为7.36±2.31分,健康对照组PSQI平均得分为3.46±2.02分,银屑病组显著高于健康对照组(P=0.000)。年龄及家庭年收入水平与银屑病患者的SAS评分呈显著负相关;女性银屑病患者PSQI评分显著高于男性银屑病患者;非寻常型银屑病患者PSQI评分显著高于寻常型银屑病患者;银屑病患者心理状况评分(SAS评分、SDS评分)与睡眠质量评分(PSQI评分)呈显著的正相关。银屑病组和健康对照组中REL基因多态位点rs702873的A等位基因频率分别为9.90和17.30,银屑病组A等位基因频率较健康对照组显著降低(P0.01,OR=0.525,95%CI:0.393-0.701)。银屑病组和健康对照组中TNIP1基因多态位点rs17728338的A等位基因频率分别为15.16和8.05,银屑病组A等位基因频率较健康对照组显著增高(P0.01,OR=2.039,95%CI:1.491-2.789)。银屑病REL基因多态位点rs702873的A等位基因频率在伴焦虑组为6.38,不伴焦虑组为12.77,A等位基因频率在银屑病伴焦虑组明显低于不伴焦虑组(P0.01)。银屑病REL基因多态位点rs702873的A等位基因频率在伴抑郁组为6.25,不伴抑郁组为15.81,A等位基因频率在银屑病伴抑郁组明显低于不伴抑郁组(P0.01)。银屑病TNIP1基因多态位点rs17728338的A等位基因频率在伴焦虑组为19.68,不伴焦虑组为11.47,A等位基因频率在银屑病伴焦虑组显著高于不伴焦虑组(P0.01)。银屑病TNIP1基因多态位点rs17728338的A等位基因频率在伴抑郁组为18.18,不伴抑郁组为10.32,A等位基因频率在银屑病伴抑郁组显著高于不伴抑郁组(P0.01)。结论1、焦虑、抑郁等负性情绪和睡眠障碍与银屑病密切相关;2、银屑病患者心理状况评分(SAS评分、SDS评分)与睡眠质量评分(PSQI评分)呈显著的正相关,表明随着SAS评分及SDS评分的升高,PSQI评分也逐渐升高。3、REL基因多态位点rs702873和TNIP1基因多态位点rs17728338等位基因及基因型与银屑病具有遗传相关性,与银屑病的发病年龄、家族史无明显相关性;4、负性情绪与REL基因多态位 rs702873和TNIP1基因多态位点rs17728338交互作用对银屑病具有相关性。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.63
【图文】：

示意图,连接酶,反应原理,示意图

逦第二部分ＲＥＬ、ＴＮＩＰ１基因多态性及负性情绪与银屑病相关性研究逦逡逑片段的ＰＣＲ（Ｌｏｎｇ－Ｒａｎｇｅ邋Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ邋Ｃｈａｉｎ邋Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＬＲ－ＰＣＲ）扩增出整个基因片逡逑段，然后把ＬＲ＿ＰＣＲ产物稀释１００倍后再作为ＤＮＡ的模板，进行外显子的扩增。逡逑１．２．７．２．２连接酶检测反应（ｌｉｇａｓｅ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ丨＇ｅａｃｔｉｏｎ，ＬＤＲ）原理和测序分型原理逡逑ＬＤＲ的原理是使用高温连接酶来识别基因多态性的位点。如果高温连接酶逡逑检测到ＤＮＡ和互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基逡逑错配，那么连接反应就不能进行＾３２１．逡逑如图１－２：右边的探针和模板有一个碱基不能配对，因此，连接反应不能进逡逑行，所以没有连接产物；左边的探针和模板ＤＮＡ完全的互补，所以能进行连逡逑接反应。通过温度控制循环，该特异性连接反应可以反复的进行，一直达到线逡逑性扩增的效果。逡逑

电泳图,电泳图,产物,位点

逡逑如图１－３：检测结果说明，左边位点即突变位点一，是Ａ／Ｃ杂合子；右边逡逑位点即突变位点二，是Ｔ纯合子。逡逑ａ－逦＜】！物邋２逡逑逦邋—＊邋邋逦P櫹楸荆模湾义稀昵柏危危矗冲义希慑澹妫椋欤酰欤欤椋穑欤澹澹颍铮翦义襄危垮文康捏遥绕渝五五五五义襄危咤魏恢坏阋诲五澹浚蒎义希停酰欤簦椋穑欤澹澹蹋模隋义希臀坏阋诲澹迷雍献樱粒缅澹╁蝁>变位：点二（托合子Ｔ邋）逡逑？邋逦逦逦邋３ｆ逦逦逦逦邋３ｒ逡逑逦１邋逦禽邋－＾５？光探计逦逦￡逦１逡逑Ｇ逦Ａ逡逑ＵＥＳ？逦ＬＤＰｋＳＪｍ逡逑７逦！，逡逑Ｔ邋｜逡逑￣！逦＂１连接产物逦ｊ４逦ｋ逡逑丨丨■丨丨■丨—一—＊逦」长度不间逦太逦＾—★逡逑ｔ邋？n,序仪检测逡逑ｉｒ逡逑．＾逦逦逡逑图１－３：测序分型原理逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ｏｆ邋ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ邋ｂｙ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑１．２．７．２．３多重ＰＣＲ扩增逡逑Ａ在ＰＣＲ的薄壁管中，配制２０Ｗ的多重ＰＣＲ体系：１０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４），逡逑２．ＯｍＭ邋ＭｇＣ１２，５０ｍＭ邋ＫＣ１，０．５｜ｉＭ邋Ｐｒｉｍｅｒｓ邋，２００ｍＭ邋ｄＮＴＰｓ，１Ｕ邋ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ。再力口逡逑入２以基因组ＤＮＡ。ＰＣＲ反应体系见表１－７逡逑４３逡逑

统计学方法,电泳,基因型,整理数据

图５：电泳与Ｇｅｎｅｍａｐｐｅｒ分析逡逑Ｆｉｇ．邋１－５邋Ｔｈｅ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ａｎｄ邋Ｇｅｎｅｍａｐｐｅｒ邋ａｎａｌｙｓｉｓ逡逑１．３统计学方法逡逑１．３．１整理数据：将Ｇｅｎｅｍａｐｐｅｒ软件数掘分析结果得出的ＲＥＬ猫因多态位点逡逑ｒｓ７０２８７３和ＴＮＩＰＩ基因多态位点ｒｓｌ７７２８３３８的基因分型数据，导入Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ邋Ｅｘｃｅｌ逡逑表中，让研宄对象的临床资料和基因型相对应，筛选出每个基因型及等位基因逡逑４７逡逑

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