角蛋白及IL-20在银屑病动物模型中的分子机制研究及反义寡核苷酸基因治疗

发布时间：2020-08-22 18:07

【摘要】： 银屑病是一种皮肤科常见并易复发的慢性炎症性皮肤病，其发病原因极其复杂，至今尚未完全明了。研究报道它与感染、内分泌机能障碍、免疫功能紊乱、酶的改变及遗传因素等相关。近年来许多学者认为T细胞的激活是银屑病发病的关键环节。角质形成细胞和皮损区浸润的T细胞可视为银屑病的主角，它们产生各种细胞因子，形成一个特殊的网络。在细胞因子的作用下，促使表皮呈现银屑病特征性的过度增殖。银屑病的组织病理学主要表现为角质形成细胞过度增生、炎症细胞聚集和真皮乳头部血管扩张三大特征，其中，角质形成细胞过度增生又是最主要的特点。角质形成细胞过度增生常常伴有异常角化过程，组织学表现为角化不全及颗粒细胞层消失，而生物化学则表现为细胞角蛋白的表达异常。正常表皮角蛋白表达模式为：基底层主要由K5/K14组成，基底层以上部分由K1/K10组成。而银屑病表皮角蛋白的表达模式发生了明显的变化，基底层以上部分出现了小分子量的角蛋白，角蛋白K14则呈现出较正常表皮过量的表达，但正常表皮所第口翠巨大学俗士学位论不表达的＊从10被代表过度增殖的角蛋白K6瓜所代替。银屑病患者皮损区表达角蛋白K6、K14、K16的现象提示在这些角蛋白中可能存在激活银屑病特异性T细胞的自身关键表位。在诸多细胞因子中，IL《0是最新被发现的一种能在正常人和银义屑病患者体内起广泛调节作用的细胞因子。研究发现，IL《0在体外可以促进角质形成细胞的增殖；IL－20的转基因小鼠可以出现明显的皮肤损害，其组织病理学改变与银屑病患者的皮损具有惊人的相似； IL－20受体是由a、D两个亚单位组成的异二聚体，两种受体亚单位在人类正常皮肤中表达水平很低，而在银屑病患者皮损中表达显著增高，提示IL－20在表皮功能和银屑病发病中具有重要意义。为了能够更好地研究银屑病的发病机制，曾经有学者设计了多种动物模型，其中心得安乳剂外涂所致豚鼠耳背部皮肤产生银屑病样皮损的方法简单易行。为进一步从分子水平研究此种银屑病动物模型的可行性及其在应用研究中的使用前景，本实验拟进行：1）5呢心得安乳剂外涂豚鼠耳背部诱导银屑病样皮损，以建立豚鼠银屑病的动物模型，并证实该方法的可重复性。2）检测动物模型皮损中几－20及角蛋白K14、K16、K17的表达水平。3）应用几七0和m 的反义寡核昔酸处理动物皮损，并观察动物模型皮损的改善程度。4）证实反义寡核昔酸局部外用在治疗包括银屑病在内的皮肤病中的可行性。实验中首先取20只健康成年豚鼠（体重3004009，性别不拘人应用5％C’得安乳剂外涂豚鼠双耳背部皮肤，每日3次，连续涂4周。取 t 材后切片，HE染色。结果显示：全部标本共40份均可见到不同程度的棘层肥厚、角化不全、表皮突延伸呈棒状、真皮乳头上伸杆状变及毛细血管扩张。应用组织评分法（典型的银屑病皮损评分在4．0－10．0 3 — — 之间）的计算结果显示：实验组组织学评分为7．5648土0．6425，正常对照组组织学评分为0．7582土0．1264，经统计学处理显示差异非常显著（P＜0．of）。应用原位杂交技术，分别检测了实验组和对照组的豚鼠耳背部皮损的几－20、K14、K16和K17mRNA的表达情况。同时根据几－20的核昔酸序列设计了PCR引物和探针，提取两组动物相应部位的组织mRNA 做反转录NR（RT－PCR），并与几－20原位杂交的检狈结果相对照。结果表明实验组皮损角质形成细胞中几七0、K14和K16的表达显著增加，而K17与对照组相比无明显差异。对几《0而言，实验组40 份标本中，31份应用 RT－PCR可检测到 IL－20有高表达，检测率为 77％。而对照组表达阳性率只有25％u0份标本中5份检测出有表达，但均为低表达人这与应用几《0核酸探针原位杂交的实验结果基本一致。为了进一步了解几－20、K16在动物模型皮损发生中的作用，本实验设计并合成了针对几－20和K16的反义寡核昔酸片段。选择20只豚鼠用5＄心得安乳剂诱导双耳产生银屑病样皮损，将针对几－20或K16 的反义寡核昔酸片段配制于乳剂基质中，每组各取10只动物，分别将
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R758.63

【共引文献】