单纯疱疹病毒Ⅱ型人源性抗gD蛋白噬菌体单链抗体库的构建

发布时间：2020-09-07 20:39

　　 生殖器疱疹(GH)是一种由Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)引起的、日益增多的传染力极强的病毒性、性传播性疾病。具有潜在致癌性，易引起胎儿早产、死胎并且为HIV感染的危险因素，极易传播及复发，目前尚无特效药物治疗。生殖器疱疹的传统治疗包括一般性治疗、抗病毒治疗以及中医药治疗。但需要指出的是，抗疱疹病毒药物治疗仅能减轻HSV感染者的症状和改善其体征，减少排毒，但治疗还不能彻底清除病毒。一般性的治疗和传统的中医药事实上也只是对症治疗。在防治HSV-2感染的手段中，疫苗是免疫治疗的有效手段之一。传统的疫苗虽然广泛应用于临床，但是也存在许多缺点。目前研制的减毒疫苗，基因工程疫苗及DNA疫苗治疗疾病都是一个主动免疫的过程，对于目前日益增多的免疫缺陷和免疫功能低下的患者来说，疫苗就不能充分发挥其治疗的优势作用。 近年来随着人们生活方式的改变，免疫缺陷患者(如AIDS)及医源性免疫功能低下的患者逐渐增多，传统的抗病毒药物治疗及疫苗的主动免疫治疗尚不能满足此类HSV感染的发病趋势。作为被动免疫的抗体治疗是GH治疗有力的补充，用基因工程方法将抗体重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)通过一段连接肽(Linker)连接而成的重组人源性单链抗体在GH治疗中的应用将为其治疗开辟一
【学位单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R752.1
【部分图文】：

图3.1外周血淋巴细胞的总RNAFig.3一1Ide沛fieationoftotdRNAofsPlneoeyte1一3:TotalRNAof:Plenoeyte.的合成为模板，01190(dT)2。为逆转录第1链。经琼脂糖凝胶电泳

第三章结果与讨论21图3一2cDNA第一链Fig.3一2几e份stsrtnadofCDNA1一2:ProudetofreversertnasePnt.3.1.3scFv基因的扩增3.1.3.1全套V。、VL基因的扩增以CoNA第l链为模板，分别以v.，back和v，，for以及v:baek和VLfor为引物，分别PCR扩增全套v.l、.V基因，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，表明扩增出的V}，基因片段约为360bp，vl.基因片段约为32Obp

1全套VH、VL基因再扩增以添加酶切位点及连接肤序列凝胶电泳表明，加上连接肤及酶切位点序列后，v;:基因再扩增的产物约为440bp，v.‘基因再扩增的产物约为420bp，见图3一5。2IM一200D一1000一750一500一2D0一100图3一5VH、VL基因PCR再扩增产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定Fig3一5Identi五e北onofseeondPCRampli五edProudetsofVH，VLgenebyagarosegelelee仃oPhoreslsM:DNAma宜.kerDL，20001:Seeond故叩五五edProudetsofVHgene2:SecondamPli五edProude始ofVLgene3.1.3.2.2SFcv基因的组装及扩增基因重叠延伸PCR后，琼脂糖凝胶中电泳后，得到1条约76Obp的片段，同预期的结果相符。见图3一6。

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本文编号：2813809