组织工程皮肤种子细胞培养及免疫原性的初步研究

发布时间：2020-09-24 17:40

　　 目的:本试验旨在探索一种能够明显缩短角质形成细胞(keratinocyte, KC)培养时间的细胞接种密度和适合组织工程应用的角质形成细胞培养基。通过检测各代角质形成细胞中朗格汉斯细胞(langerhans cell, LC)、黑色素细胞(melanocyte, MC)数量变化,及异体淋巴细胞混合试验,揭示不同代角质形成细胞、成纤维细胞免疫原性的变化,为皮肤组织工程科学选择种子细胞提供实验依据。 方法: (1)0.25%分离酶,0.125%胰酶0.01%EDTA 两步酶法分离包皮角质形成细胞,按不同密度接种,K-SFM、FAD 培养基和基础培养基分别培养,观察原代融合生长时间,传代生长情况。 (2)ATP 酶化学染色,免疫组化检测各代角质形成细胞中朗格汉斯细胞、黑色素细胞数量的变化。 (3)将冻存的不同代数人角质形成细胞和成纤维细胞,分别与健康的同种异体志愿者的外周血淋巴细胞混合,建立异体细胞体外免疫排斥模型。通过H3-TdR 标记,液体闪烁计数仪检测异体淋巴细胞增殖情况。 结果: (1)采用中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化的方法,真、表皮容易分离,台盼兰染色,活细胞数占总细胞数的95%以上。原代角质形成细胞接种密度在1×105/cm~2～5×105/cm~2 时,细胞贴壁好,增殖速度快,体外培养周期显著缩短。与FAD 培养基和基础培养基比较,K-SFM 培养的细胞呈单层生长,数代后细胞形态与原代细胞仍然十分相似,且生长较快。 (2)ATP 酶染色仅在表皮铺片中呈阳性。免疫组化染色原代角质形成细胞中混有5.8%朗格汉斯细胞和8.1%黑色素细胞,Ⅰ代角质形成细胞中混有2.1%朗格汉斯细胞和2.8%黑色素细胞。从Ⅱ代开始,角质形成细胞混杂的朗格汉斯细胞和黑色素细胞均消失。 (3)异体淋巴细胞增殖实验中,cpm 值随角质形成细胞、成纤维细胞代数增高,逐渐降低。原代、Ⅰ代角质形成细胞、成纤维细胞cpm 值下降明显,Ⅱ代、Ⅲ代、Ⅳ
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R751

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 毕建军;伍津津;朱堂友;鲁元刚;杨亚东;吴国选;;异体角质形成细胞免疫原性的初步研究[J];中国修复重建外科杂志;2007年09期

2 韩军涛;王洪涛;谢松涛;胡大海;朱雄翔;;自体细胞来源的组织工程皮肤及其实验研究[J];科学技术与工程;2008年02期

3 张杨;李秀兰;张文海;师宜健;;生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架的细胞相容性(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年03期

4 毕建军;伍津津;杨亚东;朱堂友;张才茂;;组织工程皮肤细胞对朗格汉斯细胞表型的影响[J];中国免疫学杂志;2009年12期

5 孙强;柴家科;梁黎明;杨红明;杜佳梅;王丽环;;Ca~(2+)对角质形成细胞增殖与分化调控的作用研究[J];中国美容医学;2007年09期

6 陶克;陈璧;丁国斌;谢松涛;胡大海;;利用胎儿表皮干细胞构建组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损创面[J];中华烧伤杂志;2007年04期

7 孙文娟,蔡霞,唐胜建,刘亚红,周晓燕,马桂莲,张鹏;人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养和鉴定的实验研究[J];潍坊医学院学报;2004年06期

8 刘菲;杨军;;毛囊来源干细胞及其在组织工程皮肤中的研究现状[J];中国美容医学;2008年06期

9 张杨;李秀兰;张文海;师宜健;;含有生肌液的组织工程皮肤修复兔皮肤缺损[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年46期

10 韩跃东;刘玲;何黎;顾华;金以超;;SD大鼠组织工程皮肤构建及移植的实验研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2008年04期

相关会议论文 前10条

1 程树军;秦瑶;焦红;温巧玲;;体外构建毒性检测用皮肤模型InspecskinⅡ的初步研究[A];“食品安全质量检测技术”试刊论文集[C];2008年

2 张妲;顾军;毕新岭;;FY-10及阿维A酸对角质形成细胞维A酸受体表达的影响[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

3 ;抗体搭桥角质形成细胞/单一核白细胞粘连实验与抗银屑病中药平必清的研制[A];中华中医药学会皮肤科分会学术会议、全国中医药防治皮肤病成果与技术交流大会、全国中西医结合皮肤科治疗新技术临床推广应用高级研修班文献汇编[C];2004年

4 陈辉;李筱芳;沈永年;吕桂霞;刘维达;;角质形成细胞与红色毛癣菌共孵育体系中角质形成细胞TLR2及其信号通路中下游分子的表达[A];2006中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2006年

5 李承新;刘瑛;高天文;刘玉峰;;Hedgehog信号转导通路在角质形成细胞增殖性皮肤病中的激活状态及其对角质形成细胞增殖与凋亡的影响[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

6 王懿娜;方红;彭国平;吴炜;;人不同角质形成细胞株对UVB照射的衰老和凋亡反应[A];华东六省一市第八次皮肤性病学术会议论文汇编[C];2007年

7 陈斌;毕志刚;;UVB辐射前后角质形成细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异分析[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

8 李孝建;沈雁;张志;李延仓;杨小红;曾耀英;;鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年

9 苏明;陈洵礼;吴黎明;沈斌;程浩;;NF-κB和c-myc在尖锐湿疣患者角质形成细胞中的表达和意义[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

10 徐丽敏;高琴;;中药对角质形成细胞增殖和细胞周期的体外调控研究[A];中华医学会第十五次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 浙江大学医学院附属二院教授 韩春茂　整理 余宁宁;新型组织工程皮肤动物实验成功[N];健康报;2010年

2 刘远桥 高晓莉;我国研制出组织工程皮肤[N];中国医药报;2002年

3 通讯员刘远桥高晓莉记者冯竞;给创面植上新型人造皮肤[N];科技日报;2002年

4 刘远桥 高晓莉;组织工程皮肤媲美真皮[N];医药经济报;2002年

5 刘恕;让坏死皮肤“焕然一新”[N];科技日报;2005年

6 本报记者 谢明霞;破解疑难皮肤病之谜[N];健康报;2010年

7 吴一福　梁夏;首次揭示皮肤再生机制[N];中国医药报;2010年

8 廖联明编译;“吃醋”:老疗法有新用途[N];健康报;2009年

9 本报记者 李天舒　胡德荣;捕捉一等奖“闪光点”[N];健康报;2010年

10 朱广平　陈宇 邓希;大坪医院“人造皮肤”项目获批临床试验[N];中国医药报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 毕建军;组织工程皮肤种子细胞免疫原性及组织工程皮肤移植SCID鼠的研究[D];第三军医大学;2008年

2 史明艳;山羊毛囊干细胞构建毛囊化组织工程皮肤研究[D];中国农业科学院;2012年

3 鲁元刚;复方壳多糖组织工程皮肤基底膜重建的实验研究[D];第三军医大学;2006年

4 曹玉萍;体外化学物质致敏性检测模型和组织工程皮肤真菌感染模型的构建[D];北京协和医学院;2011年

5 谢晓韵;F1F0-ATP（合成）酶在角质形成细胞分化过程中的表达及其功能研究[D];中南大学;2012年

6 张向荣;血管内皮细胞生长因子165基因转染人骨髓间充质干细胞构建组织工程皮肤的实验研究[D];南昌大学;2009年

7 刘源;构建含黑色素细胞以及血管结构的组织工程皮肤的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

8 徐燕丰;酮洛芬异丙酯经HaCaT细胞构建的组织工程皮肤的渗透、代谢及分子机制[D];第二军医大学;2005年

9 陈旭;紫外线致皮肤成纤维细胞和角质形成细胞中的自噬研究[D];北京协和医学院;2012年

10 于晓丽;羧胺三唑对角质形成细胞增殖与分化的影响及其作用机制的初步研究[D];北京协和医学院;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 毕建军;组织工程皮肤种子细胞培养及免疫原性的初步研究[D];第三军医大学;2005年

2 张广静;利用体外构建的组织工程皮肤模型进行皮肤刺激性检测的相关研究[D];河北联合大学;2011年

3 潘思璇;富血小板血浆促进组织工程皮肤创面修复的实验研究[D];复旦大学;2010年

4 孙艳;基于自体血浆蛋白支架的组织工程皮肤样复合物的构建、应用与评价[D];江苏大学;2009年

5 姜曼;组织工程皮肤的冷冻干燥保存方法研究[D];西北大学;2012年

6 李嘉s

本文编号：2826049