优化慢性荨麻疹患者屋尘螨过敏原检测方法的实验研究

发布时间：2020-10-01 21:04

　　 目的:慢性荨麻疹是常见的慢性过敏性疾病,其发病率高,病程长,发病时伴有剧烈瘙痒,给患者工作、生活带来极大困扰。该病病因复杂,可由多种因素引起,因此查找过敏原就成为了防治关键。屋尘螨普遍存在于居住环境中,是引发慢性荨麻疹的重要过敏原之一。血清过敏原特异性Ig E(s Ig E)检测作为一种安全、有效、便捷的检测手段,广泛应用于过敏性疾病的诊断。然而,在临床诊疗中我们发现目前的过敏原检测系统的检测结果常与患者的临床表现不相符。本研究旨在分析引起患者慢性荨麻疹的屋尘螨致敏蛋白组分,初步分离纯化屋尘螨致敏蛋白组分,提高屋尘螨过敏原检测准确性,进而正确指导过敏原特异性免疫治疗(Allergen immunotherapy,AIT)。方法:1对2018.01-2019.01就诊于河北医科大学第四医院皮肤科门诊患有过敏性疾病并且行了血清过敏原s Ig E检测的患者进行流行病学调查,对检测结果进行分析。2屋尘螨粗提取液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析其蛋白组分。3选取临床诊断为慢性荨麻疹且尘螨s Ig E及对粉尘临床表现均为阳性的患者的血清池为“探针”,对屋尘螨粗提取液进行免疫印迹实验(western-blot,WB),分析其致敏蛋白组分。4屋尘螨粗提取液进行高效液相色谱实验(high performance liquid chromatography,HPLC),接取各峰液,浓缩后进行SDS-PAGE及WB实验。5选取临床诊断为慢性荨麻疹且尘螨s Ig E结果与对粉尘临床表现不相符的患者血清,分别以屋尘螨粗提取液、主峰2作为包被抗原进行狭缝免疫印迹实验(slot-blot,SB)及酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),对比以上两种方法与艾康法所得结果的异同。结果:1就诊于我院皮肤科门诊的患有过敏性疾病的患者,其过敏原主要是尘螨组合、鸡蛋白和牛奶。2流行病学调查2.1 2018.01-2019.01就诊于河北医科大学第四医院皮肤科门诊的患过敏性疾病且已进行血清过敏原s Ig E检测患者共2665例,其中男性1032例,女性1633例,平均年龄为33.4±10.5岁。病种以荨麻疹、皮炎、湿疹为主,慢性荨麻疹患者644例,居首位。慢性荨麻疹患者中,疑对尘螨过敏的患者235例,所占比例最高。2.2将以上235例慢性荨麻疹患者的流行病学调查结果与血清尘螨s Ig E检测结果对比后我们发现:有87例患者临床调查结果与血清尘螨s Ig E检测结果不符。3屋尘螨SDS-PAGE结果可见16条较清晰的蛋白条带,相对分子量分别为:129k Da、117k Da、105k Da、59.1k Da、56.8k Da、49.0k Da、43.7k Da、39.1k Da、35.5k Da、28.6k Da、25.7k Da、22.4k Da、19.6k Da、18.9k Da、15.5k Da、13.9k Da。4 10例临床诊断为慢性荨麻疹,尘螨s Ig E及临床表现均为阳性患者血清池为“探针”对屋尘螨粗提取液进行WB检测,在59.1k Da、49.0k Da-39.1k Da、35.5k Da、28.6k Da、25.7k Da、22.4k Da、15.5k Da处可见阳性反应条带,根据相对分子量推测对应的组分分别为Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。5屋尘螨粗提取液HPLC结果:色谱图可见7个主峰,各峰液进行SDS-PAGE及WB检测,结果示:主峰2在61.6k Da、45.5k Da、35.8k Da、32.6k Da、26.5k Da、24.2k Da、16.3k Da可见较为明显的阳性反应条带,根据相对分子量推测对应Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。6应用主峰2作为包被抗原,无论是SB法还是ELISA法均可提高慢性荨麻疹患者屋尘螨过敏原检测结果的准确性。结论:1.就诊于我院皮肤科门诊的患有过敏性疾病的患者,其过敏原主要是尘螨组合、鸡蛋白和牛奶。2.引起慢性荨麻疹的屋尘螨的主要蛋白组分可能为Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。3.采用HPLC纯化的屋尘螨粗提取液作为包被抗原,结合SB或ELISA检测方法均可达到提高慢性荨麻疹患者屋尘螨过敏诊断的准确率。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R758.24
【部分图文】：

图 1 过敏原 sIgE 所占比例Fig.1 proportion of allergen sIgE行病学调查共入选患者 2665 例，男性 1032 例，女性 1633 例，平均年±10.5 岁。病种以荨麻疹、湿疹、皮炎为主，慢性荨麻疹患者居首位。慢性荨麻疹患者中，对尘螨过敏 235 例，所占比例对慢性荨麻疹患者进行分析，将临床表现阳性（自觉对粉尘

SDS-PAGE 结果：1 列为 mf crude extract from house du: crude extract from house du临床表现均为阳性患者的血WB 检测结果：在 61.6kDa25.7kDa、22.4kDa、15.5kD推测对应的组分分别为 Derr p3、Der p2，如下图：

液 SDS-PAGE 结果：1 列为 mas of crude extract from house dust e 2: crude extract from house dust 及临床表现均为阳性患者的血清 WB 检测结果：在 61.6kDa、a、25.7kDa、22.4kDa、15.5kDa 量推测对应的组分分别为 Der p4Der p3、Der p2，如下图：

【参考文献】

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本文编号：2832007