他卡西醇对体外培养人黑素细胞生物学性状的影响

发布时间：2020-10-19 13:08

　　 一、研究背景与目的 白癜风是皮肤科常见的一种获得性色素脱失性皮肤病,发病率约为0.5～1%,其发病率无性别差异。确切的发病机制目前仍不清楚,可能与遗传、神经、精神、自身免疫等多种因素有关。目前的治疗手段主要包括:外用补骨脂素类药物、糖皮质激素、免疫调节剂,自体表皮移植,局部光疗或光化学疗法:窄谱中波紫外线、准分子激光及准分子光,中医中药等,但目前白癜风的治疗尚无特效疗法,个体对不同疗法的疗效差异很大,往往疗程较长且易出现不良反应。 近年来临床上尝试使用他卡西醇[1,24(OH)2D3,商品名萌尔夫,上海百润]局部外用治疗白癜风,取得了一定疗效。他卡西醇是活性维生素D3衍生物,文献报道活性维生素D3对角质形成细胞具有增殖抑制、诱导分化的作用,最初应用于治疗银屑病。1998年Glaser等报道两例银屑病患者在采用局部外用卡(钙)泊三醇(维生素D3衍生物)联合光疗后出现色素沉着现象。随后国内外的临床医生尝试将其单独局部外用或联合光疗、激素等治疗白癜风,均取得了很好的临床疗效。但也有研究报道钙泊三醇联合UVB不能提高白癜风复色。由于该疗法应用于治疗白癜风的时间尚短,目前关于活性维生素D3衍生物治疗引起白癜风皮损区复色的机制研究较少。Ranson等报道1α-25,二羟维生素D3可以提高酪氨酸酶活性,Watabe等1α- 25 ,二羟维生素D3诱导小鼠前黑素细胞的分化与刺激内皮素B受体的表达,而国内徐前喜等报道1α,25-二羟维生素D3和UVB能促进黑素细胞增殖及黑素合成。关于他卡西醇治疗白癜风的作用机制国内外研究较少,国外Katayama等报道联合应用他卡西醇和日照可以引起体外培养黑素细胞的c-Kit mRNA表达上调,目前国内尚未见实验室研究方面的报道。 我们推测,他卡西醇治疗白癜风有可能是通过直接或间接作用于黑素细胞促进复色,但目前尚未有实验研究证实,为了初步研究他卡西醇治疗白癜风的作用机制,我们观察了他卡西醇对体外培养人黑素细胞生物学性状的影响。 二、方法与结果 1.体外黑素细胞培养,给予不同浓度他卡西醇处理,采用MTT法测定细胞增殖,碱裂解法测定黑素合成,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性。结果:10-8 mol/L他卡西醇能刺激黑素细胞增殖,10-8和10-9mol/L能促进黑素合成, 10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能显著增强正常人黑素细胞酪氨酸酶活性。 2.运用半定量RT-PCR法检测TYR、TRP-1 mRNA的表达。结果:10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能显著上调TYR、TRP-1 mRNA的表达。 三、结论 他卡西醇可促进黑素细胞增殖,并提示该药物可能通过上调酪氨酸酶家族中关键基因TYR、TRP-1 mRNA的表达来提高酪氨酸酶活性,最终增加黑素合成。 通过以上实验,为研究他卡西醇促进白癜风皮损区复色中的作用机制提供了初步的实验基础。
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R758.41
【部分图文】：

(4) 加入 0.1 % L-DOPA 溶液 10 μl/孔，37℃反应 2 h；(5) 选择 490 nm 波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值(A)。三、统计学分析数据以x±s 表示，应用 SPSS13.0 软件，进行配对 t 检验，P < 0.05 为差异有计学意义。实验结果一、正常人黑素细胞的培养和鉴定细胞接种后 24～48 h 即可贴壁，起初细胞呈梭形，两端各有一个相对称的起，随着细胞的增殖，突起增多并更加明显。培养初期可见混杂生长的角质和成纤维细胞，3 周后可获得大量纯化的黑色素细胞。(图 1)

件进行电泳条带半定量分析：积分光密度(integrated optical density，IOD)表示，积分泳条带面积的乘积。计算各目的条带与 β-actin 条带 IO达量。积分光密度测定时注意去除背景。，应用 SPSS13.0 软件，进行配对 t 检验，P < 0.05 为差结 果完整性：RNA 样品经 1%琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯条清晰的 RNA 条带，电泳结果(图 6)。1 2 3 456

RT-PCR检测TYRmRNA的表达
【参考文献】

相关期刊论文 前7条

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本文编号：2847240