IL-22对HaCaT细胞增殖、凋亡及分泌HB-EGF影响的研究

发布时间：2020-10-29 14:27

　　 银屑病是皮肤病中常见的易复发的由免疫细胞介导的慢性炎症性皮肤病,在全球发病率约为2%-3%。主要的症状表现为表皮过度增殖、角化不全、真皮血管周围大量免疫细胞浸润。银屑病是角质形成细胞和失调的免疫细胞共同作用的结果。目前认为银屑病的发病机制主要是由T细胞介导的以KC为靶点的免疫应答反应。Th22细胞是新发现的T细胞亚群,其功能主要通过IL-22实现。有研究表明,在银屑病病人中,血浆中IL-22和银屑病的严重程度呈明显的正相关。我们的前期研究表明肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor, HB-EGF)在银屑病表皮KC异常增殖和其转归中发挥重要作用。因此,我们推测Th22细胞及IL-22可能干扰KC分泌HB-EGF,进而参与银屑病表皮异常增殖的发生、发展。本实验研究IL-22对HaCaT细胞功能和HaCaT细胞中HB-EGF表达的影响对揭示银屑病表皮异常增殖的发病机制具有重要意义。 目的：本文研究白介素22(Interleukin-22, IL-22)及IL-22siRNA对HaCaT细胞增殖、凋亡及分泌HB-EGF的影响。 方法：以不同浓度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)IL-22和IL-22siRNA作用于HaCaT细胞,用MTT法检测对细胞增殖的影响；用流式细胞术分析对细胞凋亡的影响；用免疫组化法、Western blot法、ELISA法和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响。应用SPSS16.0统计软件包进行统计学处理,差异有显著性标准为P0.05。 结果：1、IL-22促HaCaT细胞增殖作用的强度与其浓度有关：不同浓度IL-22处理组的细胞增殖率均高于对照组,当IL-22浓度低于100μg/L时,其促HaCaT细胞增殖作用随着浓度的升高而增强,但当IL-22浓度高于100μg/L时其促HaCaT细胞增殖作用减弱。IL-22siRNA处理组细胞增殖率较对照组低。 2、IL-22抑制HaCaT细胞凋亡作用的强度与其浓度有关：不同浓度IL-22处理组的细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较对照组低,差异具有统计学意义。当IL-22浓度低于100μg/L时,其抑制HaCaT细胞凋亡作用随着浓度的升高而增强,但当IL-22浓度高于100μg/L时其抑制HaCaT细胞凋亡作用减弱。IL-22siRNA处理组细胞早期和晚期凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义。 3、IL-22促HaCaT细胞分泌HB-EGF的作用的强度与其浓度有关：不同浓度IL-22处理组的细胞分泌HB-EGF的量均高于对照组,且随着IL-22浓度的升高,其促HB-EGF分泌作用逐渐增强。ⅠL-22siRNA处理组HB-EGF分泌量较对照组低。 结论：IL-22可促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡,且可促进HaCaT细胞分泌HB-EGF。IL-22siRNA可抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡,且可抑制HaCaT细胞分泌HB-EGF。HaCaT细胞分泌HB-EGF增加可能是IL-22促进HaCaT增殖、抑制凋亡的原因之一。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R758.63
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、IL-22及IL-22 siRNA对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响
    1.1 对象和方法
        1.1.1 材料
        1.1.2 方法
        1.1.3 统计方法
    1.2 结果
        1.2.1 HaCaT细胞培养
        1.2.2 IL-22对HaCaT细胞增殖的影响
        1.2.3 IL-22 siRNA对HaCaT细胞增殖的影响
        1.2.4 IL-22对HaCaT细胞凋亡的影响
        1.2.5 IL-22 siRNA对HaCaT细胞凋亡的影响
    1.3 讨论
        1.3.1 检测HaCaT细胞增殖、凋亡方法的选择
        1.3.2 IL-22或IL-22 siRNA对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响
    1.4 小结
二、IL-22及IL-22 siRNA对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
    2.1 对象和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
        2.1.3 统计方法
    2.2 结果
        2.2.1 IHC检测IL-22对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
        2.2.2 IHC检测IL-22 siRNA对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
        2.2.3 WB检测IL-22对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
        2.2.4 WB检测IL-22 siRNA对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
        2.2.5 ELISA法检测IL-22或IL-22 siRNA对HaCaT细胞HB-EGF蛋白浓度与总蛋白浓度比值的影响
        2.2.6 实施荧光定量RT-PCR检测IL-22及IL-22 siRNA对HaCaT细胞HB-EGF mRNA表达的影响
    2.3 讨论
        2.3.1 不同方法检测IL-22及IL-22 siRNA对HaCaT细胞分泌HB-EGF的影响
        2.3.2 存在的缺陷和今后的研究方向
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    Th22及IL-22在银屑病中的研究进展
        综述参考文献
    银屑病的研究进展
        综述参考文献
致谢

【引证文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 刘欣欣;IL-22对角质形成细胞表达HB-EGF及TIG3作用机制的研究[D];天津医科大学;2015年

本文编号：2861029