沙眼衣原体E血清型的小鼠生殖道感染模型研究

发布时间：2020-11-04 09:49

　　 非淋菌性尿道炎(NGU)是目前最常见的性传播疾病,而其中30%～40%是由C.t感染所致。C.t的流行在国内外均产生了相当重的社会负担,C.t生殖道感染同时还增加了HIV感染的危险性。但是至今为止,C.t导致泌尿生殖道感染的致病机制仍然没有完全弄清楚,尤其是局部感染导致的系统性疾病。建立C.t的小鼠生殖道感染动物模型对更深一步了解C.t感染的致病机制、免疫、免疫病理、疾病进展过程以及对该病原体所致NGU的药物治疗疗效及毒性观察,疫苗研制和疫苗免疫效果评定等各方面均有一定的帮助价值。C.t疫苗的研制是C.t防治史上非常重要的一页,而建立在动物模型基础上的疫苗免疫效果评定是疫苗研制进程中必不可缺的一步。 目的:通过阴道接种途径建立C.t E血清型的小鼠生殖道感染模型,同时监测小鼠阴道清除C.t E血清型时间,并在有限时间内初步了解小鼠单次C.t E血清型生殖道感染后抗C.t IgG抗体的变化规律,为C.t疫苗的研制奠定扎实的动物试验基础。 方法:在细胞培养的基础上通过多种方法提高C.t培养的感染率,成功培养C.t E型株,然后用高速离心提纯C.t EB并定量(以IFU/mL表示),同时用考马斯亮蓝法进行C.t EB蛋白定量。选择6-7周性成熟BALB/c雌性小鼠,通过阴道接种C.t感染小鼠,接种前10d、3d股部肌肉注射黄体酮以增加小鼠对C.t感染的敏感性。感染后相应时间通过阴道-宫颈口拭子PER、衣原体单克隆抗体免疫荧光、C.t分离培养以及ELISA方法检测血液中抗C.t IgG抗体来证实感染的存在。实验通过C.t分离培养观察小鼠阴道清除C.t E血清型时间,并通过自行摸索ELISA实验条件来检测、观察感染后不同时间点小鼠血清中抗C.t IgG抗体滴度及其变化。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R759
【部分图文】：

1、正常MCcoy细胞的观察实验中，McCoy细胞生长状态对实验结果影响很大，而细胞的接种浓度又影响着其生长状态。我们接种的细胞浓度为2x105加工(见图2一)l，对生长良好的细胞倒置显微镜下进行了形态学观察。传代48h后，细胞贴壁良好，生长旺盛，分布均匀，系双极或三极，呈纺锤形，层次感强，胞体较大，胞浆丰富，有双极树突状结构。2x105/mL密度的细胞4h8后形成致密单层。(见图2一2)图2一1刚俏化完的McCoy细胞，细胞图2一2致密单层细胭，贴壁良好，生长旺悬浮在液体中，树枝状突皱缩，胞体变圆盛，分布均匀，呈纺锤形，层次感强，有双极树突状结构2、C.t感染的McC0y细胞形态观察McCoy细胞接种入C.tE型标准株后

硕士研究生学位论文结果图2一3C.t感染后6h的细胞，细胞形态仍呈梭形，突触明显。图2一C.t感染后2h4的细胞，细胞已较前变圆，突触消失，细胞呈椭圆形。图2一5C.t感染后44h的细胞，细胞已经成近圆形，未见突触，少量细胞己死亡。3、卢戈氏碘液染色法观察培养结果碘液染色后显微镜下观察结果。阳性标本可看到McCoy细胞呈黄色或淡黄色，包涵体呈棕褐色(见图2一6、图2一7)。由图可发现90%以上的细胞23

结果100X200X图2一6显微镜下可见染成棕褐色的包涵体图2一7显微镜下可见染成棕褐色的包涵体在实验中我们发现未染色的标本在显微镜下也可以观察到包涵体，400倍镜下可以看到感染了包涵体的细胞体积变大，细胞核被挤向一侧，包涵体占据了细胞体积的大部分，呈球形、空泡状，转动细螺旋有立体感(见图2一8)。400X图2一8镜下未染色的包涵体呈近球形，二、C.tEB浓度定量及蛋白定量1、C.tEB浓度定量孵育44一48小时后的标本风干、甲醇固定24占据了细胞体积的大部分10分钟后碘染，计数每孔包涵
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 闫玲,冯树异,周劲松,王双元;应用McCoy细胞及Hep-2细胞培养沙眼衣原体D型株[J];北京医科大学学报;1997年01期

2 陈木开,韩建德,陈小红,涂裕英;MoPn沙眼衣原体致小鼠生殖道感染模型的初步研究[J];中国人兽共患病杂志;2004年08期

本文编号：2869942