TRPA1在DNCB诱导的小鼠特应性皮炎模型中的作用及机制研究
发布时间：2020-11-07 09:23
目的:建立DNCB诱导的AD小鼠模型,研究TRPA1基因敲除对AD发病的作用,并探索其潜在机制。然后进一步探讨TRPA1拮抗剂HC-030031对DNCB诱导的AD小鼠是否具有一定的治疗作用。方法:(1)首先在野生雄性C57BL/6小鼠上建立DNCB诱导的AD模型,经qRT-PCR、WB和免疫组化检测背部皮损TRPA1 mRNA和蛋白的表达水平变化。(2)为进一步研究TRPA1在DNCB诱导的AD模型的作用及机制,再次建立DNCB诱导的AD模型,分为3组:TRPA1~(-/-)+DNCB组,WT+DNCB组以及空白组。造模中观察小鼠的皮炎评分,耳部厚度,瘙痒评分的动态变化。造模结束后取小鼠血清以及耳背部皮损组织,经HE染色评估病理变化,经ELISA比较血清总IgE水平变化,经甲苯胺蓝染色评估肥大细胞浸润程度,经qRT-PCR检测皮损组织炎症因子mRNA水平变化,经WB以及免疫荧光检测巨噬细胞浸润变化。(3)为探索TRPA1拮抗剂HC-030031对AD是否具有治疗作用,再次建立DNCB诱导的AD模型,分为3组:HC-030031+DNCB组,WT+DNCB组和空白组,观察小鼠的皮损严重程度及耳部厚度,瘙痒评分的变化。造模结束后,取耳背部皮损组织,检测病理变化。结果:(1)皮损以及HE染色显示在C57BL/6小鼠上成功建立DNCB诱导的AD模型,并发现背部皮损中TRPA1的mRNA和蛋白表达升高。(2)TRPA1~(-/-)组小鼠皮炎评分,耳部厚度,瘙痒评分明显低于WT组小鼠,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色显示TRPA1~(-/-)组小鼠表皮增生以及炎性细胞的浸润程度较WT组小鼠减轻,同时TRPA1~(-/-)组小鼠真皮肥大细胞的浸润减轻,而血清总IgE水平与WT组小鼠相比无明显差异。qRT-PCR结果显示:TRPA1~(-/-)组小鼠背部皮损前炎症因子(IL-1β,TNF-α,IL-6)以及Th2炎症因子(IL-4,IL-13)较WT小鼠下降而Th1炎症因子INF-γ无明显差异,同时发现TRPA1~(-/-)缓解了皮损巨噬细胞的浸润。(3)经HC-030031治疗后,小鼠皮损严重程度,耳部厚度,瘙痒评分较WT组下降,且表皮增生以及炎性细胞的浸润程度减轻。结论:在DNCB诱导的AD小鼠模型中,TRPA1缺陷不仅可缓解瘙痒,而且可能通过减轻肥大细胞浸润、前炎症及Th2炎症因子和巨噬细胞的浸润,发挥免疫保护作用。同时TRPA1拮抗剂HC-030031对DNCB诱导的AD小鼠具有一定的治疗作用。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R758.2
【部分图文】：
图 1 AD 造模方案Figure 1 Schematic protocol of DNCB -induced AD model鼠背部皮损、耳部肿胀程度及瘙痒评价照文献报道[17]，皮损严重程度通过评估 4 个症状：水肿；红斑/出屑/干燥，每种症状按照 0（无）、1（轻度）、2（中度）和 3（于药物涂抹后合计每只小鼠的症状评分。采用游标卡尺测量小测量 3 次后取其平均值。参照文献报道[13]，首先将小鼠置于观涂抹 DNCB 于小鼠的背部及耳部后 30min，然后让操作者或者 10min 内小鼠搔抓涂抹变应原皮肤及耳部的次数。部皮损及耳部组织 HE 染色21 天时，处死小鼠后，剪取小鼠背部病灶/涂液部位皮肤以及耳部cm 大小，以 4%多聚甲醛进行固定 24h。然后经 75%、85%、95
用 Graph Pad Prism6.0 软件进行分析，计量资料以平均值 标准误数据使用独立样本 t 检验进行评估，P < 0.05 差异有统计学。生型 C57BL/6 小鼠上建立 DNCB 诱导的 AD 模型先在野生型 C57BL/6 上建立 DNCB 诱导的 AD 模型，结果显示：以及耳部皮肤逐渐可见水肿、红斑、脱屑、结痂等炎症反应，空白肤无明显变化，与对照组鼠耳厚度相比，模型组小鼠耳厚度肿胀程ig.2A)。小鼠背部与耳部皮损组织病理显示：模型组小鼠皮损角化、真皮浅层以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，而对照组小鼠未见明Fig.2B）。以上实验结果均表明在野生型 C57BL/6 小鼠建立 DNCB功。
重庆医科大学硕士研究生学位论文Representative photographs of the dorsal and ear skin lesions from vehieventh days of the experiment. (B)Representative H&E staining of dorsaons from groups of mice on the last day of the experiment, Scale bar, 80 μmA1 在 DNCB 诱导的 AD 小鼠皮损中表达上调CR 分析皮损 TRPA1 mRNA 相对表达，结果显示，与对照组 的 RNA 表达明显上调，差异有统计学意义(t=4.93，P=0.008ot 分析皮损 TRPA1 蛋白表达，结果显示：与对照组相比，模型显上调(Fig.3B)。经免疫组化分析可见：与对照组相比模型PA1 在表皮、真皮均表达量明显增加，结果如 Fig.3C 所示。
【参考文献】
本文编号：2873751
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R758.2
【部分图文】：
图 1 AD 造模方案Figure 1 Schematic protocol of DNCB -induced AD model鼠背部皮损、耳部肿胀程度及瘙痒评价照文献报道[17]，皮损严重程度通过评估 4 个症状：水肿；红斑/出屑/干燥，每种症状按照 0（无）、1（轻度）、2（中度）和 3（于药物涂抹后合计每只小鼠的症状评分。采用游标卡尺测量小测量 3 次后取其平均值。参照文献报道[13]，首先将小鼠置于观涂抹 DNCB 于小鼠的背部及耳部后 30min，然后让操作者或者 10min 内小鼠搔抓涂抹变应原皮肤及耳部的次数。部皮损及耳部组织 HE 染色21 天时，处死小鼠后，剪取小鼠背部病灶/涂液部位皮肤以及耳部cm 大小，以 4%多聚甲醛进行固定 24h。然后经 75%、85%、95
用 Graph Pad Prism6.0 软件进行分析，计量资料以平均值 标准误数据使用独立样本 t 检验进行评估，P < 0.05 差异有统计学。生型 C57BL/6 小鼠上建立 DNCB 诱导的 AD 模型先在野生型 C57BL/6 上建立 DNCB 诱导的 AD 模型，结果显示：以及耳部皮肤逐渐可见水肿、红斑、脱屑、结痂等炎症反应，空白肤无明显变化，与对照组鼠耳厚度相比，模型组小鼠耳厚度肿胀程ig.2A)。小鼠背部与耳部皮损组织病理显示：模型组小鼠皮损角化、真皮浅层以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，而对照组小鼠未见明Fig.2B）。以上实验结果均表明在野生型 C57BL/6 小鼠建立 DNCB功。
重庆医科大学硕士研究生学位论文Representative photographs of the dorsal and ear skin lesions from vehieventh days of the experiment. (B)Representative H&E staining of dorsaons from groups of mice on the last day of the experiment, Scale bar, 80 μmA1 在 DNCB 诱导的 AD 小鼠皮损中表达上调CR 分析皮损 TRPA1 mRNA 相对表达，结果显示，与对照组 的 RNA 表达明显上调，差异有统计学意义(t=4.93，P=0.008ot 分析皮损 TRPA1 蛋白表达，结果显示：与对照组相比，模型显上调(Fig.3B)。经免疫组化分析可见：与对照组相比模型PA1 在表皮、真皮均表达量明显增加，结果如 Fig.3C 所示。
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 薛如君;张锡宝;;神经病理性瘙痒的研究进展[J];中国医学文摘(皮肤科学);2015年06期
本文编号：2873751
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/pifb/2873751.html
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