乙酰肝素酶反义寡核苷酸对恶性黑素瘤生长抑制作用的实验研究

发布时间：2021-01-04 10:50

　　乙酰肝素酶（heparanase，Hpa）是一种新近克隆成功的葡萄糖醛酸内切酶，也是体内惟一能够降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（heparin sulphate proteoglycan，HSPG）的内切糖苷酶，通过降解HSPG，破坏细胞外基质和基底膜结构，在肿瘤的浸润和转移中起重要作用。目前研究证明，Hpa mRNA和蛋白在多种恶性肿瘤如胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤及恶性黑素瘤等组织中的表达异常增高，并且证实其表达水平增高与肿瘤的侵袭、转移潜能以及患者的预后密切相关；最新研究显示，Hpa与卵巢癌、胃癌等肿瘤的生长、增殖及凋亡亦密切相关。但是，有关Hpa对恶性黑素瘤生长调控的相关研究，特别是以Hpa基因为靶点的反义寡核苷酸技术抑制恶性黑素瘤细胞生长的研究，国内外均未见文献报道。恶性黑素瘤（Malignant melanoma，MM）是一种常见的黑素细胞肿瘤，具有恶性程度高、极易发生早期侵袭和转移以及死亡率高等临床特点，在所有恶性肿瘤中占1％～2％。有资料显示，本病晚期患者的平均生存期仅为6～10月。近年来，世界范围内的恶性黑素瘤发病率呈明显增长趋势。2006年... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

Hpa蛋白在恶性黑素瘤和黑素细胞痣中的表达F19.1一2ExpressionofHpaproteinmelanoeytieinmalignantmel朋omaandneVUS

各AsoDN的10娜OUL，20脚叮01/L，30脚叮oUL三个浓度组的细胞计数相比均有显著性差异(尸均二0.000);30娜 oFLAsoDN一t2细胞数量与其它各组相比均有显著性差异(尸均<0.05)(见表2一1、图2一1)。裹2一i转染72一各组细脸计数 (x104/Inl)介bleZ一 1CelleouniineaehgrouPaftertransfeetionfor72h组别10林mo比(州丫七夕)ASODN一tl20.625士0.93220林mo比(J粉心)18.792士1.05430料mo比(d粉心)13.125士2.370ASODN一tZ19.667士1.46314.833土1.23210.25肚0.775ASODN一 t321.458士2.28816.917土0.71912.333士1.586ASODN一t422.042士0.57917.625士1.22213.167士1.339N一ODN33.743士1.96032.441土2.036 31.482士2.263注:对照组为(32.583士2.548)xlo勺ml 2243311005050505崭氧一偏芭ASODN一 t1ASODN一 tZASODN一 t3ASODN一t4N一ODN图2一1转染72h后各组细胞计数 (X10000/m1) F19.2一 1Cel]eountineaehgrouPaftertransfeetionfor 72h(X10000/ml)3.HPa一ASODN转染后A375细胞 HPamRNA表达的改变光镜下观察原位杂交结果，3组均可见到 HPamRNA阳性表达，阳性信号呈蓝色细小颗粒，定位于胞浆;其中对照组、N一ODN组的杂交信号强、着色深，且阳性细胞数多，即显示高表达，而ASODN一t2组杂交信号弱、染色淡，阳性细胞数也极少，即显示低表达。对照组、N一ODN组和ASODN一tZ组的评分依次为4.250士0.500，4.000切.817，

组相比无显著性差异(P=0.585)，而对照组和ASODN一t2组、N一ODN组和ASODN一t2组相比均有显著性差异(尸，，几均为0.000)(见表2一2，图2一2及照片2一5一6)。裹2一2转染 24hHPamRNA在各组细脸中的裹达几bleZ一 2ExPressionofeellHPam丑 NAineaehgrouP aftertransfeetionfor24h组别对照组评分(灭生，)尸>0.05尸 <0.05 4.250士0.500N一ODN组4.000士 0.817IvsZ(0.585)Ivs3(0.000)Zvs3(0.000)ASODN一t2组 1.25肚0.500注:1为对照组，2为N一oDN组，3为30林 moULAsoDN一:组对照组N一ODN组ASODN一tZ组图2一2转染 24hHpaInRNA在各组细胞中的表达 F19.2一 2ExPressionofHpa证 NAineaehgrouPaftertransfeetionfor24h4.HPa一AsoDN转染后A375细胞HPa蛋白表达的改变免疫组化结果显示，三组均可见到HPa蛋白阳性染色，呈红色颗粒状定位于胞浆;其中对照组、N一ODN组的染色深，阳性细胞数多，呈高水平表达，而ASODN一t2组的染色淡

【参考文献】：
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本文编号：2956639