Cre/loxP位点特异性重组酶系统联合SV40LTAg诱导人黑素细胞可逆性永生化

发布时间：2021-01-20 14:21

　　白癜风是一种常见的后天性局部脱色素性皮肤病,据国内外统计其发病率约为0.5²%,且有逐年增高趋势。白癜风的病因和发病机制尚未明确,病理表现为皮损局部表皮和毛囊中的黑素细胞（melanocytes,MC）减少或缺失,从而使黑素合成减少或缺失,临床表现为境界清楚的色素脱失斑。近年来,国外学者研究表明,白癜风患者皮损局部和全身均可检测到针对MC表面抗原的自身抗体和细胞毒性CD8+T细胞,认为白癜风是一种自身免疫性脱色素性皮肤病。白癜风的治疗比较困难,目前有很多治疗方法,主要包括光化学治疗、内服药物治疗、外用药物治疗以及外科治疗,前三种治疗方法都存在疗效个体差异大、副作用大等不足,外科治疗主要包括自体表皮移植、自体MC移植和异体MC移植等方法,其中自体MC移植是疗效最肯定、副作用最小的方法,因而外科治疗已经成为白癜风治疗研究的热点。目前临床应用于移植治疗的MC主要来源于患者自身正常皮肤分离的MC体外培养。成人表皮中MC含量极少,只占表皮细胞的2%左右,正常情况下体外培养的MC生长缓慢、增殖能力极为有限,常需使用促MC生长因子如经典的霍乱毒素（cholera toxin,C... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pEGFP-N1环形图

1-2 SV40LTAg-loxP-EGFP-neo 质粒环形 EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切 4h 后，1.2%琼盒切胶回收 2.1kb 左右的目的片段。后，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，用琼脂糖片段。酶切反应体系：物 体积(μl)双酶切 buffer 2.0EGFP-loxP 片段 5.0R I 1.0H I 1.02O 11.0积 20.0h。用 T4 DNA 连接酶将 SV40LT 酶切

结 果一. SV40LTAg 片段的扩增与鉴定(一) SV40TAg 两个外显子的扩增与拼接：以质粒 pUC19-SV40T 为模板，分别以 SV40T F01 / SV40T R01，SV40T F02 为引物，SV40T 两个外显子的扩增 PCR 产物，SV40T I，SV40T II，经 1.胶电泳分析，目的片段分别为 279bp 和 1.9kb(图 1-3)。以 SV40T I, SV40T I40T F01/ SV40T R02 为引物，进行 PCR 扩增，扩增产物即为 SV40LTAg，糖凝胶电泳分析，目的片段为 2.1kb(图 1-4)。M 1 2 M 1

【参考文献】：
期刊论文
[1]SV40大T抗原对人皮肤成纤维细胞生物学行为的影响[J]. 王新文,金岩,刘源,王军琳,赵宇,董蕊.  第四军医大学学报. 2003(06)
[2]白癜风同种异体黑素细胞移植初步研究[J]. 卢涛,高天文,刘玉峰,李春英,孙林潮.  中国皮肤性病学杂志. 2001(04)
[3]SV40诱导髁突软骨细胞永生化的实验研究[J]. 段小红,吴军正,毛勇,李峰,杨彤元.  中华口腔医学杂志. 2001(01)
[4]化学脱色法制备白癜风动物模型[J]. 龙子江,白玫,樊彦,丁荣光,王元勋.  安徽中医学院学报. 1997(06)



本文编号：2989202