高迁移率蛋白-1在特应性皮炎中的作用及机制研究

发布时间：2021-02-18 23:09

　　目的:特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）是一种遗传相关性、慢性、复发性、炎症性皮肤病,在发达国家儿童中的发病率可高达10%²0%,且在世界范围内呈上升的趋势。本病通常初发于婴儿期,病程呈慢性,部分患者病情可以迁延到成年,患者往往有剧烈瘙痒,严重影响生活质量,并给家庭带来持续的经济负担。AD确切的发病机制尚不完全清楚,但免疫异常、伴随炎性介质的释放在本病中起重要作用。目前,对于AD的治疗以口服抗组胺药,外用糖皮质激素、钙调磷酸酶抑制剂及保湿剂等为主,但慢性复发性或顽固性AD的治疗仍是一个难题。因此,研究AD的致病因素,探索有效控制皮炎症状的新的治疗靶点和措施,对改善患者预后和生活质量具有重要的理论和实践意义。高迁移率族蛋白-1（high mobility group box-1,HMGB1）是一种普遍存在于真核细胞中,高度保守的非组蛋白染色体蛋白。它的主要功能是稳定核小体的结构和调节基因转录。然而,研究发现HMGB1可因细胞损伤或坏死而被动地释放,或者由单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等免疫细胞主动分泌到细胞外基质,作为细胞因子与多种细胞表面的受体... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：HMGB1在特应性皮炎样综合征小鼠模型中的作用
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 需要配制的试剂
        2.2 研究对象和分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 建立AD样综合征动物模型
            2.3.2 皮炎评分
            2.3.3 ELISA法检测血清总IgE
            2.3.4 小鼠皮肤组织切片制作
            2.3.5 组织HE染色
            2.3.6 组织甲苯胺蓝染色
            2.3.7 组织间接免疫荧光染色
            2.3.8 Westernblot
            2.3.9 Real-timePCR
            2.3.10 统计学方法
    3 结果
        3.1 DNCB诱导的AD样综合征小鼠模型大体表现及皮炎评分
        3.2 皮损组织病理改变
        3.3 血清总IgE水平改变
        3.4 HMGB1及其受体RAGE在皮损组织中的表达
        3.5 皮损组织中HMGB1、RAGE、NF-κB、TNF-α和IL-6蛋白的表达
        3.6 皮损组织中TNF-αmRNA和IL-6mRNA的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 ：HMGB1/RAGE在肥大细胞中的表达
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 主要试剂和仪器
            7.1.1 主要试剂
            7.1.2 主要仪器
            7.1.3 需要配制的试剂
        7.2 实验细胞
        7.3 实验方法
            7.3.1 细胞培养
            7.3.2 细胞甲苯胺蓝染色
            7.3.3 细胞间接免疫荧光染色
            7.3.4 流式细胞术检测FSMC表面分子FcεRI和CD117的表达
            7.3.5 Westernblot检测FSMC中HMGB1、RAGE、TNF-α和IL-6蛋白的表达
            7.3.6 统计学方法
    8 结果
        8.1 细胞培养
        8.2 FSMC的鉴定
            8.2.1 FSMC不同培养时期甲苯胺蓝染色
            8.2.2 流式细胞术检测FSMC表面FcεRI和CD117的表达
        8.3 HMGB1及其受体RAGE在肥大细胞中的表达
            8.3.1 HMGB1及其受体RAGE在FSMC中的表达
            8.3.2 HMGB1及其受体RAGE在P815细胞中的表达
            8.3.3 FSMC中HMGB1、RAGE、TNF-α和IL-6蛋白的表达
    9 讨论
    10 结论
第三部分 ：HMGB1对肥大细胞活化的影响
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 主要试剂和仪器
        12.2 实验对象
        12.3 实验方法
            12.3.1 CCK-8法检测HMGB1和GL对P815细胞增殖的影响
            12.3.2 细胞实验分组
            12.3.3 P815细胞脱颗粒实验
            12.3.4 流式细胞术检测HMGB1对P815细胞内Ca2+浓度的影响
            12.3.5 流式细胞术检测HMGB1对P815细胞表面CD117表达的影响
            12.3.6 Westernblot
            12.3.7 Real-timePCR
            12.3.8 募集作用检测
            12.3.9 统计学方法
    13 结果
        13.1 HMGB1和GL对P815细胞增殖的影响
        13.2 HMGB1对P815细胞脱颗粒的影响
        13.3 HMGB1对P815细胞内Ca2+浓度的影响
        13.4 HMGB1对P815细胞CD117表达的影响
        13.5 HMGB1对P815细胞RAGE、TNF-α、IL-6和MCTryptase蛋白表达的影响
        13.6 HMGB1对P815细胞NF-κB信号通路的影响
        13.7 HMGB1对P815细胞HMGB1mRNA和RAGEmRNA表达的影响
        13.8 HMGB1对小鼠腹腔肥大细胞的募集作用
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述一
    参考文献
综述二
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3040234