肿瘤抑制基因ING4对黑素瘤细胞株M14生物学行为影响的体外实验研究

发布时间：2021-04-14 15:51

　　黑素瘤是恶性程度很高的皮肤肿瘤,预后不良,其发生机制目前仍不十分清楚。肿瘤抑制基因在黑素瘤的发生、发展中具有重要的作用。ING4基因是一种新的肿瘤抑制基因,其功能还不完全清楚。目前国内外尚未见有关其与黑素瘤的研究报道。本研究旨在探讨ING4在黑素瘤发病机制中的作用及机制。（1）ING4在黑素瘤组织中的表达经免疫组化法检测发现,ING4在皮肤黑素瘤组织中的表达明显下调,与良性色素痣组织对比,差异有显著性。（2）ING4重组表达质粒的构建及细胞转染通过RT-PCR法从人的正常组织获得目的基因片断,体外构建真核表达载体pCDNA3.1-ING4,经PCR及基因测序证实重组质粒构建正确。将其转导入人黑素瘤细胞株M14,经免疫细胞化学及蛋白印迹法证实转染的外源ING4基因可高效表达ING4蛋白。（3）ING4对M14细胞生长的影响经MTT、流式细胞术及TUNEL法检测发现,转染外源性ING4基因后,M14细胞的增殖明显受抑,凋亡增加,并伴有G2/M期阻滞。此外蛋白印迹法还发现,M14细胞呈现细胞周期调控蛋白表达的变化及凋亡通路的活化。（4）ING4对M14细胞侵袭能力的影响经重组基底膜侵袭实验、... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

黑素瘤组织ING4表达的免疫组化染色光镜图像

penNA3.1一取G4构建后，转化入及eh。 riehiaeolinH5a进行扩增，提取nNA分别采用PCR法及DNA测序对其进行鉴定。经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后，在750bp处可见目的条带(图5)。DNA测序结果显示得到的克隆基因序列与GenBank上已发表的人ING4序列 (GeneID:51147)一致。表明重组质粒构建成功。2弓0七p500匕p7印bp1000bp加!刃bp图5可见重组质粒重组质粒pcDNA3.l一 ING4PCR扩增产物的凝胶电泳分析pcDNA3.1一 ING4PcR扩增产物在凝胶上电泳于约750bp处出现单一条带::Marker;2:peDNA3.l一 INo4PeR扩增产物

果RNA，经RT.PCR法扩增出来的产物，(约75obp)，大小与预期值相符(图4)，在1%未见250bP500bP750bP 1000bP200叻P图4从正常的人胃粘膜组织分离的ING4基因编码序列Rl’ -PCR扩增产物的凝胶电泳图象可见RT-PcR扩增产物在凝胶上电泳于约750bp处出现单一条带:卜Marker;2:空泳道;3:RT-PCR扩增产物2重组质粒pCDNA3.l一INe4的鉴定 penNA3.1一取G4构建后，转化入及eh。 riehiaeolinH5a进行扩增，提取nNA分别采用PCR法及DNA测序对其进行鉴定。经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后，在750bp处可见目的条带(图5)。DNA测序结果显示得到的克隆基因序列与GenBank上已发表的人ING4序列 (GeneID:51147)一致。表明重组质粒构建成功。2弓0七p500匕p7印bp1000bp加!刃bp图5可见重组质粒重组质粒pcDNA3.l一 ING4PCR扩增产物的凝胶电泳分析pcDNA3.1一 ING4PcR扩增产物在凝胶上电泳于约750bp处出现单一条带::Marker;2:peDNA3.l

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3137592